[发明专利]人源细胞悬浮培养的培养基组合及溶瘤痘苗病毒的制备方法有效
| 申请号： | 202010545535.2 | 申请日： | 2020-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN111440770B | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 曾宇明;范琦;李坤;刘冬连 | 申请（专利权）人： | 东曜药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12N7/00 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 温可睿 |
| 地址： | 215024 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞 悬浮 培养 培养基 组合 痘苗 病毒 制备 方法 | ||
1.培养基组合在HeLa细胞悬浮培养中的应用，所述培养基组合为：
EX-Cell® 293培养基和DMEM培养基的组合；其中EX-Cell® 293培养基和DMEM培养基的体积比为1:2、1:1或2:1；
或EX-Cell® 293培养基和VirusPro®CD HeLa培养基的组合；其中EX-Cell® 293培养基和VirusPro®CD HeLa培养基的体积比为1:2、1:1或2:1；
或VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的组合；其中VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的体积比为1:2、1:1或2:1；
或EX-Cell® 293培养基、VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的组合；其中EX-Cell® 293培养基、VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的体积比为1:1:1、1:2:1、2:1:1或1:1:2。
2.用于HeLa细胞悬浮培养的培养基组合，其为：
EX-Cell® 293培养基和DMEM培养基的组合；其中EX-Cell® 293培养基和DMEM培养基的体积比为1:2、1:1或2:1；
或EX-Cell® 293培养基和VirusPro®CD HeLa培养基的组合；其中EX-Cell® 293培养基和VirusPro®CD HeLa培养基的体积比为1:2、1:1或2:1；
或VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的组合；其中VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的体积比为1:2、1:1或2:1；
或EX-Cell® 293培养基、VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的组合；其中EX-Cell® 293培养基、VirusPro®CD HeLa培养基和DMEM培养基的体积比为1:1:1、1:2:1、2:1:1或1:1:2。
3.根据权利要求2所述的培养基组合，所述EX-Cell® 293培养基、VirusPro®CD HeLa培养基或DMEM培养基中还添加有促进细胞生长的因子；
所述因子选自胰岛素、生长激素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子、类胰岛素生长因子。
4.权利要求2或3所述的培养基组合在制备溶瘤痘苗病毒中的应用。
5.HeLa细胞悬浮培养的方法，其特征在于，将悬浮驯化的HeLa细胞接种于权利要求2或3所述的培养基组合，振荡培养。
6.一种溶瘤痘苗病毒的制备方法，其特征在于，包括：将悬浮驯化的HeLa 细胞接种于权利要求2或3所述的培养基组合，振荡培养至细胞密度不低于5×106cells/ml，然后稀释细胞至密度为2×106cells/ml ~5×106cells/ml接种病毒，继续培养2~3 d后收毒。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述稀释细胞至密度为3×106cells/ml ~4×106cells/ml接种病毒。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述振荡培养的条件为34~38℃，3%~10% CO2，100~130rpm，培养24～96小时后传代或接种病毒。
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