[发明专利]一种虎杖PcMYB1基因启动子及其扩增方法和应用

说明书

本发明公开了一种虎杖PcMYB1基因启动子及其扩增方法和应用，属于基因工程技术领域，其中PcMYB1基因启动子的序列如序列表SEQ NO.1所示，并且本发明还克隆得到3个PcMYB1基因启动子的5’端缺失片段，通过转基因技术和GUS组织化学染色验证了PcMYB1基因启动子和PcMYB1基因启动子的5’端缺失片段的活性。本发明不仅首次克隆得到虎杖PcMYB1基因启动子，并且克隆得到3个具有活性的PcMYB1基因启动子的5’端缺失片段的序列较短，可降低基因重组的和遗传转化操作难度，对植物中MYB转录因子的表达具有重要价值，同时本发明还提供了利用hiTAIL‑PCR扩增虎杖PcMYB1基因启动子所采用的特异性引物及其序列。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种虎杖PcMYB1基因启动子及其扩增方法和应用。

背景技术

虎杖(Polygonum CuspiPatum Sieb.et Zucc.)是蓼科多年生草本植物，根状茎粗壮，茎直立，高可达2米，空心，叶宽卵形或卵状椭圆形，近革质，两面无毛，顶端渐尖，基部宽楔形、截形或近圆形，托叶鞘膜质，圆锥花序，花单性，雌雄异株，腋生；苞片漏斗状，花被淡绿色，瘦果卵形，有光泽黑褐色，8-9月开花，9-10月结果。根或根茎入药，富含白藜芦醇、类黄酮等药效成分。

MYB转录因子家族是植物基因组中最大的转录因子家族之一，参与调控药用植物药效成分合成，丹参SmMYB39通过调控苯丙烷类代谢途径关键酶基因的表达，进而影响迷迭香酸的合成。水母雪莲中bHLH和WP40两种转录因子形成二元复合体后，和MYB转录因子共同调控类黄酮合成途径中结构基因的表达。苦荞种子萌发过程中子叶中黄酮的积累受FtMyb2与FtMyb3的调控。在紫外线、伤害和病原菌等胁迫条件下，葡萄VvMYB14和VvMYB15调控白藜芦醇合酶基因的表达，进而影响白藜芦醇的合成。

目前，有关MYB基因转录因子的研究已经比较广泛与透彻，但是虎杖MYB基因启动子的相关研究尚未见报道。相关研究发现MYB家族基因启动子序列中除了含有启动子TATA-box、CAAT-box等基本的组成元件之外，还含有一些特有的与激素、抗逆境、组织器官发育等相关的顺式作用元件，推测对MYB转录因子的激活和诱导起到调控作用。

发明内容

本发明的目的是基于虎杖PcMYB1基因的cDNA序列扩增虎杖PcMYB1基因启动子，并克隆得到3个PcMYB1基因启动子的5’端缺失片段。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种启动子，所述启动子的序列如序列表SEQ NO.1所示。

一种启动子的5’端缺失片段，分别为P2、P3和P4，其中P2的序列如序列表SEQ NO.2所示，P3的序列如序列表SEQ NO.3所示，P4的序列如序列表SEQ NO.4所示。

所述启动子或所述启动子的5’端缺失片段在激活和诱导虎杖PcMYB1基因表达中应用。

一种载体，所述载体包含所述启动子或所述启动子的5’端缺失片段。

一种遗传工程菌，所述遗传工程菌包含上述载体。

所述启动子的扩增方法，所述扩增方法为hiTAIL-PCR法，具体步骤包括：

S1、采用PCR缓冲液、dNTP、虎杖基因组DNA、ExTaq-DNA聚合酶和引物LAD1-1、LAD1-2、LAD1-3、LAD1-4、SP0-1进行第一轮PCR扩增，其中引物SP0-1的序列如序列表SEQ NO.5所示；

S2、将步骤S1得到的产物稀释后作为模板，采用PCR缓冲液、dNTP、ExTaq-DNA聚合酶和引物AC1、SP1-1进行第二轮PCR扩增，其中引物SP1-1的序列如序列表SEQ NO.6所示；