[发明专利]一种虎杖PcMYB1基因启动子及其扩增方法和应用

权利要求书

1.一种启动子，其特征在于，所述启动子的序列如序列表SEQ NO.1所示。

2.权利要求1所述的一种启动子的5’端缺失片段，其特征在于，所述5’端缺失片段分别为P2、P3和P4，其中P2的序列如序列表SEQ NO.2所示，P3的序列如序列表SEQ NO.3所示，P4的序列如序列表SEQ NO.4所示。

3.权利要求1所述的启动子或权利要求2所述的启动子的5’端缺失片段在激活和诱导虎杖PcMYB1基因和GUS基因表达中的应用。

4.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求1所述的启动子或权利要求2所述的启动子的5’端缺失片段。

5.一种遗传工程菌，其特征在于，所述遗传工程菌包含权利要求4所述的载体。

6.根据权利要求1所述的一种启动子，其特征在于，所述启动子的扩增方法为hiTAIL-PCR法，具体步骤包括：

S1、采用PCR缓冲液、dNTP、虎杖基因组DNA、DNA聚合酶和引物LAD1-1、LAD1-2、LAD1-3、LAD1-4、SP0-1进行第一轮PCR扩增，其中引物SP0-1的序列如序列表SEQ NO.5所示；

S2、将步骤S1得到的产物稀释后作为模板，采用PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和引物AC1、SP1-1进行第二轮PCR扩增，其中引物SP1-1的序列如序列表SEQ NO.6所示；

S3、将步骤S2得到的产物稀释后作为模板，采用PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和引物AC1、SP2-1进行第三轮PCR扩增，其中引物SP2-1的序列如序列表SEQ NO.7所示；

S4、将步骤S3得到的产物回收后连接到载体上，并转化至感受态细胞中，挑取重组子测序，得到所述启动子的序列。

7.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，用于扩增所述启动子的上游引物如序列表SEQ NO.8所示，用于扩增所述启动子的下游引物如序列表SEQ NO.12所示。

8.根据权利要求2所述的启动子的5’端缺失片段，其特征在于，用于扩增P2的上游引物如序列表SEQ NO.9所示，用于扩增P3的上游引物如序列表SEQ NO.10所示，用于扩增P4的上游引物如序列表SEQ NO.11所示，用于扩增P2、P3和P4的下游引物相同，所述下游引物的序列如序列表SEQ NO.12所示。

9.一种诱导目的基因表达的方法，其特征在于，所述方法包括：

S1、将权利要求4所述的载体转化至农杆菌中；

S2、用步骤S1得到的农杆菌侵染虎杖组织细胞；

S3、将步骤S2中被侵染的虎杖组织细胞进行培养，使目的基因在虎杖组织细胞中表达。