[发明专利]一种漆酶环境激素电化学传感器的制作方法

说明书

本发明公开了一种漆酶环境激素电化学传感器的制作方法，包括以下步骤：准备仪器和试剂：使用的主要仪器和设备包括pH计、Milli‑Q超纯水系统、数显智能控温磁力搅拌器、数控超声清洗器、电化学工作站、台式高速冷冻离心机；本发明通过设置准备仪器和试剂、制备乙酸盐缓冲液、制备磷酸盐缓冲液、制备双烯雌酚母液、制备Nafion溶液、漆酶生物传感器制备、对双烯雌酚的检测、干扰实验和实际牛奶样品检测的工艺流程，解决了目前的电化学测量方法容易受到干扰，稳定性差，准确性难以得到保证，重现性有限的问题，该漆酶环境激素电化学传感器，具备抗干扰性强、拥有很好的重现性，以及较好存储稳定性的优点。

技术领域

本发明涉及激素电化学技术领域，具体为一种漆酶环境激素电化学传感器的制作方法。

背景技术

最早的电化学传感器可以追溯到20世纪50年代，当时用于氧气监测。到了20世纪80年代中期，小型电化学传感器开始用于检测PEL范围内的多种不同有毒气体，并显示出了良好的敏感性与选择性。为保护人身安全起见，各种电化学传感器广泛应用于许多静态与移动应用场合。

漆酶环境激素电化学传感器是电化学传感器的一种，但是目前的电化学测量方法容易受到干扰，稳定性差，准确性难以得到保证，重现性有限，为此提出一种漆酶环境激素电化学传感器的制作方法，来解决此问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种漆酶环境激素电化学传感器的制作方法，解决了目前的电化学测量方法容易受到干扰，稳定性差，准确性难以得到保证，重现性有限的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种漆酶环境激素电化学传感器的制作方法，包括以下步骤：

步骤1：准备仪器和试剂：使用的主要仪器和设备包括pH计、Milli-Q 超纯水系统、数显智能控温磁力搅拌器、数控超声清洗器、电化学工作站、台式高速冷冻离心机，使用的主要试剂包括Nafion®全氟磺酸离子交换树脂（5 wt.%）、羧基化多壁碳纳米管（COOH-MWCNTs）、双烯雌酚（Dienestrol，DIES）、无水乙酸（CH₃COOH）、无水乙酸钠（CH₃COONa）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O）、多巴胺（DA）、抗坏血酸（AA）、尿酸（UA）、葡萄糖（Glc）、无水乙醇（EtOH），其他材料包括Ag/AgCl电极、铂丝、玻碳电极；

步骤2：制备乙酸盐缓冲液：分别用超纯水配置0.1 M的乙酸溶液与0.1 M乙酸钠溶液，将pH计探头插入到0.1 M的乙酸钠溶液中，然后将0.1 M乙酸溶液缓缓加入0.1 M的乙酸钠溶液中，边加边搅拌，分别得到pH值4.0、4.5、5.0、6.0的乙酸缓冲液；

步骤3：制备磷酸盐缓冲液：分别用超纯水配置0.1 M的磷酸二氢钠溶液与0.1 M磷酸氢二钠溶液，然后将两者溶液按比例混合，搅拌均匀后，由pH计测量分别得到pH为7.0、8.0的磷酸盐缓冲液；

步骤4：制备双烯雌酚母液：用分析天平称取0.00266g双烯雌酚溶于5 ml无水乙醇中，避光保存于-20℃冰箱中备用；

步骤5：制备Nafion溶液：5%的Nafion溶液用无水乙醇稀释到0.5%，在4℃冰箱中避光保存备用；

步骤6：漆酶生物传感器制备：所用工作电极为Lac2/COOH-MWCNTs/Nafion修饰电极，电极制作方法为：将COOH-MWCNTs、漆酶（Lac2）和0.1%的Nafion混合搅拌均匀，溶液达到稳定状态后取7 μL该溶液滴涂到预处理过的玻碳电极表面，在室温下干燥后放入温度为4 ℃的冰箱中保存备用；