[发明专利]一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法

说明书

本发明公开了一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，该方法包括如下步骤：1)向无动物成分来源添加的MSCBM培养基中加入一定量的烟酰胺单核苷酸，配制得到含NMN的培养基；2)采用上述的含NMN的培养基对P10代及以上衰老状态的脐带间充质干细胞冲悬，得到细胞悬液；3)调整上述细胞悬液中的细胞密度，并将细胞悬液接种于细胞培养设备中且置于培养箱中进行扩增培养。本发明通过选用含NMN的MSCBM培养基来培养衰老状态的脐带间充质干细胞的培养方法，能够有效的增加衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性和细胞增殖速率，且随着培养时间的延长，脐带间充质干细胞的细胞增殖速率并不会随之下降。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法。

背景技术

脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的间充质干细胞，其来源于人脐带华通氏胶组织。由于脐带间充质干细胞及其分泌的细胞因子具有抑制炎症的作用，且在特定条件下能分化成多种成体细胞，所以可以应用于临床中急性损伤、慢性炎症、退行性疾病及受损组织的再生修复，用途广泛且用量较大，临床使用对该细胞的大量扩增有迫切需求。

但由于脐带间充质干细胞在体外扩增多代之后，会产生细胞活性下降、细胞增殖速率下降的衰老现象，从而限制了其大规模扩增的速度和总量，同时也限制了大规模市场化应用的可行性；为此，能够找到抑制脐带间充质干细胞传代多次后发生衰老的培养方法或者激活抗衰老状态脐带间充质干细胞活性的培养方法是当前研究的热点。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，解决了现有的脐带间充质干细胞在体外多次扩增培养时易出现细胞衰老的问题。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是：一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，该方法包括如下步骤：

S1、向无动物成分来源添加的MSCBM培养基中加入一定量的烟酰胺单核苷酸，配制得到NMN的浓度为3～9uM的含NMN的培养基；

S2、采用所述S1制得的含NMN的培养基对P10代及以上衰老状态的脐带间充质干细胞冲悬，得到细胞悬液；

S3、调整所述S2得到的细胞悬液中的细胞密度，并将所述细胞悬液接种于细胞培养设备中且置于培养箱中进行扩增培养。

优选地，所述S1中，所述含NMN的培养基中NMN的浓度为3uM，6uM 或9uM。

优选地，所述S3中，所述细胞悬液中的细胞密度为1×10⁶～5×10⁶个/mL。

优选地，所述细胞悬液中的细胞密度为1×10⁶个/mL。

优选地，所述S3中，所述细胞培养设备为细胞培养板或细胞培养瓶，接种于所述细胞培养板或细胞培养瓶中的细胞密度为0.6×10⁴～1.2×10⁴个/cm²。

优选地，接种于所述细胞培养板或细胞培养瓶中的细胞密度为0.9×10⁴个 /cm²。

优选地，所述S3中，所述培养箱为CO₂培养箱，所述培养时的温度为35℃～ 38℃。

优选地，所述CO₂培养箱中CO₂的体积百分浓度为4.5～5.5％。