[发明专利]一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法在审
| 申请号： | 202010529590.2 | 申请日： | 2020-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN111484974A | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 耿倚云;宋芸娟;胡士庶;沈洁;沈艳 | 申请（专利权）人： | 深圳市旷逸生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 深圳市合道英联专利事务所(普通合伙) 44309 | 代理人： | 廉红果 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 添加 nmn 激活 衰老 状态 脐带 间充质 干细胞 细胞 活性 培养 方法 | ||
1.一种通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
S1、向无动物成分来源添加的MSCBM培养基中加入一定量的烟酰胺单核苷酸，配制得到NMN的浓度为3～9uM的含NMN的培养基；
S2、采用所述S1制得的含NMN的培养基对P10代及以上衰老状态的脐带间充质干细胞冲悬，得到细胞悬液；
S3、调整所述S2得到的细胞悬液中的细胞密度，并将所述细胞悬液接种于细胞培养设备中且置于培养箱中进行扩增培养。
2.根据权利要求1所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述S1中，所述含NMN的培养基中NMN的浓度为3uM，6uM或9uM。
3.根据权利要求2所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述S3中，所述细胞悬液中的细胞密度为1×106～5×106个/mL。
4.根据权利要求3所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述细胞悬液中的细胞密度为1×106个/mL。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述S3中，所述细胞培养设备为细胞培养板或细胞培养瓶，接种于所述细胞培养板或细胞培养瓶中的细胞密度为0.6×104～1.2×104个/cm2。
6.根据权利要求5所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，接种于所述细胞培养板或细胞培养瓶中的细胞密度为0.9×104个/cm2。
7.根据权利要求6所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述S3中，所述培养箱为CO2培养箱，所述培养时的温度为35℃～38℃。
8.根据权利要求7所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述CO2培养箱中CO2的体积百分浓度为4.5～5.5％。
9.根据权利要求6-8任意一项所述的通过添加NMN激活衰老状态脐带间充质干细胞的细胞活性的培养方法，其特征在于，所述无动物成分来源添加的MSCBM培养基的具体配置方法为：向MSCBM培养基中加入MSC无血清添加剂EliteGroTM-Advanced，所述添加剂EliteGroTM-Advanced与所述MSCBM培养基的体积比为(2～5)：100。
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