[发明专利]常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法

权利要求书

1.一种常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：检测无需确定多态性位点的碱基类别，只需通过检测该位点是否发生了单碱基延伸反应来判断检测靶标核酸的有无，从而判断样本种目标病原体的有无；具体包括以下步骤：

S1、多重PCR，根据待鉴定位点两端的侧翼序列设计引物，进行多重PCR以扩增待检测位点；

S2、应用虾碱性磷酸酶对所述步骤S1的PCR反应产物进行处理，消化剩余的脱氧核糖核苷三磷酸；

S3、单碱基延伸反应，延伸探针结合到所述步骤S1的PCR的扩增子上，令延伸的第一个碱基为需检测的多态性位点；

S4、质谱检测，通过质谱检测延伸单碱基质量以明确该多态性位点的碱基构成。

2.根据权利要求1所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述目标病原体包括42种常见呼吸道感染病毒、11种常见呼吸道感染细菌和2种肺炎衣原体/支原体。

3.根据权利要求2所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述42种常见呼吸道感染病毒包括冠状病毒和常见呼吸道感染病毒；所述冠状病毒包括人冠状病毒SARS-CoV-2、人冠状病毒229E、人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63、人冠状病毒HKU1、严重急性呼吸综合征冠状病毒SARSr-CoV、中东呼吸综合征冠状病毒MERSr-CoV。

4.根据权利要求2所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述常见呼吸道感染细菌包括嗜肺军团菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌、百日咳鲍特菌、白喉棒状杆菌。

5.根据权利要求3所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述人冠状病毒SARS-CoY-2的所述延伸探针序列为ACCTACAACTTGTGCTAATGACCC，靶标基因为ORFlab。

6.根据权利要求3所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述人冠状病毒SARS-CoV-2的所述延伸探针序列为ACACCATCATTAAATGGTAGGACA，靶标基因为S。

7.根据权利要求3所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述人冠状病毒SARS-CoV-2的所述延伸探针序列为ACGCGTACGCGCAAACAG，靶标基因为N。

8.根据权利要求3所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述中东呼吸综合征冠状病毒MERSr-CoV的所述延伸探针序列为cccttattCTCCTTCAACTTTTGGGACG，靶标基因为N。

9.根据权利要求2所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述肺炎衣原体的所述延伸探针序列为CTGCAGCACCTTCCCATAT；靶标基因为ompA。

10.根据权利要求2所述的常见五十五种呼吸道病原体高通量鉴别检测方法，其特征在于：所述肺炎支原体的所述延伸探针序列为TGGCAACCTCACCTGGTTCGGGC；靶标基因为P1adhenSion gene。