[发明专利]一种稻曲菌素A纯品的制备方法

说明书

本申请公开了一种稻曲菌素A纯品的制备方法，涉及农产品安全检测技术领域，具体包括：取稻曲球粉末或稻绿核菌培养物粉末，加入提取液进行超声提取，过滤，得到稻曲菌素A粗提取液；调节稻曲菌素A粗提取液的pH，再采用大孔吸附树脂柱进行柱层析，收集洗脱液；将含有稻曲菌素A的洗脱液旋转蒸发，再用高速逆流色谱分离纯化，收集洗脱液；选择只含有稻曲菌素A的洗脱液进行合并后旋转蒸干，再溶于水中，冷冻干燥，即制得稻曲菌素A纯品。本申请解决了稻曲菌素A纯品分离纯化成本高的问题，提高了单次制备量，并降低了分离纯化成本。

技术领域

本申请涉及农产品安全检测技术领域，具体涉及一种稻曲菌素A纯品的制备方法。

背景技术

稻曲病是一种常发于水稻穗部的真菌病害，其致病真菌为稻绿核菌。稻曲病菌侵染水稻穗部形成黄色或黑色稻曲球，该病害可使孕穗期谷粒营养运输受阻，不能正常发育，造成空秕率升高，千粒重下降，影响水稻产量。稻绿核菌在侵染水稻后会产生稻曲菌素，导致稻米作物受毒素污染；全球每年约有25％的水稻作物会受到稻曲菌素污染，造成很大的经济损失与安全风险。目前已发现共计7种稻曲菌素，分别为稻曲菌素A，B，C，D，E，F与稻曲菌素G，其共同的特征母核为一个经由醚键连接而成的十三元环缩肽，其中稻曲菌素A(Ustiloxin A，化学结构式见式1)是最主要的一类污染物，其含量占所有稻曲菌素污染物含量80％以上。

稻曲菌素A可以抑制真核细胞中有丝分裂过程，稻曲菌素A对有丝分裂过程的半数抑制浓度(IC₅₀)为0.7μmol/L，与秋水仙碱相当，因此稻曲菌素A具有很强的细胞毒性与植物毒性。实验表明稻曲菌素A对人的胃、肺、乳腺、结肠和肾细胞系的生长分离均有抑制作用。当家猪被饲喂受稻曲菌素A污染的稻米时将出现中毒反应，表现为：肉猪生长减慢，增重速率降低；多种内脏器官病变，病变较为明显的有肝、肾和脾；影响母猪的生殖性能，除卵巢出现充血、出血外，产仔数、初生窝重、断奶窝重及仔猪成活率均下降，同时还出现产死胎、干尸胎及畸形胎等情况。除此之外，稻曲菌素A还将导致作物种子出芽率显著下降，影响后茬作物的产量。

鉴于稻曲菌素A污染的普遍性和危害性，针对它的污染风险评估、毒理研究以及控制方法开发等受到业界的广泛关注，对于纯化的稻曲菌素A毒素纯品的需求很大。然而目前全球尚无商品化稻曲菌素A标准品在售，且常用的分离纯化方法需要用到反相硅胶填料与Sephadex葡聚糖凝胶，成本高昂，严重限制了其广泛应用。因此亟需开发一种能够大规模、安全高效、廉价的稻曲菌素A制备纯化技术。

发明内容

本申请实施例通过提供一种稻曲菌素A纯品的制备方法，解决了现有稻曲菌素A纯品分离纯化成本高的问题，提高了稻曲菌素A纯品的单次制备量，并降低了分离纯化成本。

为达到上述目的，本申请主要提供如下技术方案：

本申请提供了一种稻曲菌素A纯品的制备方法，包括以下步骤：

(1)取稻曲球粉末或稻绿核菌培养物粉末，加入提取液进行超声提取，过滤，收集滤液得到稻曲菌素A粗提取液；

(2)调节稻曲菌素A粗提取液的pH，再采用大孔吸附树脂柱对稻曲菌素A粗提取液进行柱层析，收集洗脱液；

(3)将含有稻曲菌素A的洗脱液旋转蒸发，再用高速逆流色谱分离纯化，收集洗脱液；

(4)将含有稻曲菌素A的洗脱液旋转蒸干，再溶于水中，冷冻干燥，即制得稻曲菌素A纯品。

作为优选，所述提取液为含有体积分数为1.0％的甲酸和体积分数为0.1％的吐温-20的水溶液。

作为优选，所述超声提取采用的料液比为1/5-1/20。

作为优选，所述步骤(1)中采用低速或中速滤纸过滤。

作为优选，所述步骤(2)中调节稻曲菌素A粗提取液的pH至中性。