[发明专利]一种DNA可逆保护和分离的方法

权利要求书

1.一种DNA可逆保护和分离的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将DNA分子通过酶处理，获得含5’磷酸化DNA的样品；

(2)将含5’磷酸化DNA的样品解旋获得单链DNA；

(3)将单链DNA进行5’腺苷化标记，获得含5’腺苷化DNA的样品；

(4)使用腺苷化敏感的5’→3’核酸外切酶对步骤(3)获得的样品进行消化，去除未被5’腺苷化修饰的单链DNA，纯化后获得腺苷化修饰的目标DNA分子；

(5)对腺苷化修饰的目标DNA分子进行去腺苷化处理，即可获得目标DNA分子；

步骤(1)中，所述酶为能够将含有5’羟基的DNA转化为5’磷酸化DNA的酶；所述酶选自T4多聚核苷酸激酶；

步骤(3)中，所述5’腺苷化标记为通过酶修饰DNA的5’末端；所述酶选自T4 DNALigase；

步骤(4)中，所述腺苷化敏感的5’→3’核酸外切酶选自T5核酸外切酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述DNA分子为双链或单链；所述DNA分子为单链时，省略步骤(2)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述解旋过程为热变性。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)(3)(5)分别还包括对反应后样品的纯化处理过程。

5.一种采用如权利要求1-4任一所述的方法检测DNA分子损伤和修饰位点的非诊断目的的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(i)提取DNA分子、破碎、去磷酸化，获得样品；

(ii)按照上述方法获得目标DNA分子；

(iii)对目标DNA分子进行测序并分析比对，即可获得损伤或修饰位点。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(i)中，所述破碎的步骤为超声破碎。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述破碎的大小为200-500bp。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(iii)中，所述测序选自Sanger测序或Illumina测序。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(iii)中，测序为Illumina测序时还包括以下步骤：将去目标DNA分子转化为双链DNA后，再经PCR扩增，产物用于Illumina测序。