[发明专利]一种海洋短杆菌及其活性组分和制备方法

说明书

本发明公开了一种海洋短杆菌Brevibacterium sp.MTL5‑77，所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.18765。本发明还公开了所述菌株的抗肺癌活性组分的制备方法以及用该方法制备获得的抗肺癌活性组分。本发明还公开了所述菌株的抗肺癌活性组分的制药用途和包含该活性组分的抗肺癌药物。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一海洋短杆菌及其活性组分和制备方法。

背景技术

肿瘤是指在致癌基因作用下，细胞基因发生了改变，失去了对细胞正常生长的调控，导 致单克隆性异常增生而形成的新生物。恶性肿瘤由于分化不成熟、生长较快，进入破坏器官 的结构和功能，进而发生转移，所以对机体的影响较为严重。观察全球抗肿瘤药物研发现状， 发现市场增速呈现放缓趋势，新兴国家市场中上市15年以上的老药仍是主力军，新上市的药 物价格呈现越来越昂贵的趋势，因此抗肿瘤药物的研发仍具有巨大的市场潜力，应不断投入 各方面资源，治疗肿瘤疾病。

由于深海环境目前仍处于探索的高潮期，各方面新的发现正在不断涌现。对于深海中存 在的大量微生物资源，其在药物研发方面具有巨大的潜在价值。通过提取微生物代谢产物， 寻找蕴藏其中的抗肿瘤药物，不断促进海洋活性物的开发和利用，就具有了重大的研究价值 与研究意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种从马里亚纳海沟海水中培养分离得到的能够产生抗癌物质的菌 株、其抗癌活性组分及其制备方法和用途。

本发明的第一方面是提供了一种短杆菌Brevibacterium sp.MTL5-77，所述菌株保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.18765。

在一优选例中，所述菌株的基因组16S rDNA碱基序列如SEQ ID No.1所示。

本发明的第二方面是提供了一种上述短杆菌Brevibacterium sp.MTL5-77的活性组分A的 制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)发酵培养

将短杆菌Brevibacterium sp.MTL5-77的菌株接种到20～40mL培养基中，于10～20℃、 150～220r/min的恒温振荡培养箱里培养18～28h，得种子发酵液；

将种子发酵液按照4～10％的接种量接种到40～100mL培养基中，于相同条件下继续培养20～28h，得扩增菌液；

将扩增菌液按照4～10％的接种量接种到400～600mL培养基中，于相同条件下继续培养 36～72h，得发酵菌液；

所述培养基为：3～8g蛋白胨，0.5～1.5g酵母粉，0.005～0.015g磷酸铁，海水定容至1 L，在1.05kg/cm²，115～121℃，15～30min的条件下灭菌；

(2)离心

收集菌株MTL5-77的发酵菌液，在8000～10000r/min，4～10℃，15～30min条件下离心， 收集发酵上清液；

(3)真空冷冻干燥

将发酵上清液真空冷冻干燥，得菌株MTL5-77的活性组分A。

本发明的第三方面是提供了一种所述短杆菌Brevibacterium sp.MTL5-77的活性组分B的 制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)发酵培养

将短杆菌Brevibacterium sp.MTL5-77的菌株接种到20～40mL培养基，于10～20℃、 150～220r/min的恒温振荡培养箱里培养18～28h，得种子发酵液；