[发明专利]一种海洋短杆菌及其活性组分和制备方法

权利要求书

1.一种短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株，其特征在于，所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO. 18765。

2.一种如权利要求1所述的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分A的制备方法，所述方法包括如下步骤：

（1）发酵培养

将短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株接种到20~40 mL培养基中，于10~20℃、150~220 r/min的恒温振荡培养箱里培养18~28 h，得种子发酵液；

将种子发酵液按照4~10%的接种量接种到40~100 mL培养基中，于相同条件下继续培养20~28h，得扩增菌液；

将扩增菌液按照4~10%的接种量接种到400~600 mL培养基中，于相同条件下继续培养36~72h，得发酵菌液；

所述培养基为：3~8 g 蛋白胨，0.5~1.5 g 酵母粉，0.005~0.015 g 磷酸铁，海水定容至 1 L，在1.05 kg/cm²，115~121 ℃，15~30 min的条件下灭菌；

（2）离心

收集菌株MTL5-77的发酵菌液，在8000~10000 r/min，4~10 ℃，15~30 min条件下离心，收集发酵上清液；

（3）真空冷冻干燥

将发酵上清液真空冷冻干燥，得菌株MTL5-77的活性组分A。

3.一种如权利要求1所述的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分B的制备方法，所述方法包括如下步骤：

（1）发酵培养

将短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株接种到20~40 mL培养基，于10~20℃、150~220 r/min的恒温振荡培养箱里培养18~28 h，得种子发酵液；

将种子发酵液按照4~10%的接种量接种到40~100mL培养基中，于相同条件下继续培养20~28h，得扩增菌液；

将扩增菌液按照4~10%的接种量接种到400~600 mL培养基中，于相同条件下继续培养36~72 h，得发酵菌液；

所述培养基为：3~8 g 蛋白胨，0.5~1.5 g 酵母粉，0.005~0.015 g 磷酸铁，海水定容至 1 L，在1.05 kg/cm2，115~121 ℃，15~30 min的条件下灭菌；

（2）离心破碎

收集菌株MTL5-77的发酵菌液，在8000~10000 r/min，4~10 ℃，15~30 min条件下离心，收集菌体，按PBS缓冲液:菌体=1:1~1:3 v/v 比例将PBS缓冲液加入菌体中，搅拌均匀，使菌体重新溶解后经破碎，离心获得菌体破碎上清液；

（3）真空冷冻干燥

将菌体破碎上清液真空冷冻干燥，得菌株MTL5-77的活性组分B。

4.一种用如权利要求2所述的制备方法制备获得的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分A。

5.一种用如权利要求3所述的制备方法制备获得的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分B。

6.如权利要求4所述的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分A或如权利要求5所述的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分B在制备预防或者治疗非小细胞肺癌的药物中的用途。

7.一种抗肺癌药物，其特征在于，所述药物包含如权利要求4所述的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分A或如权利要求5所述的短杆菌（Brevibacterium sp.）MTL5-77菌株的活性组分B。