[发明专利]一种用于检测STR位点的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测STR位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒通过如下步骤制得：

步骤一：制备引物组；

步骤二：通过步骤一引物组与标准对照单品制备试剂得备用试剂；

步骤三：通过步骤二中备用试剂制备试剂盒。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测STR位点的试剂盒，其特征在于：所述步骤一中引物组包括SEQ ID NO.1所示单链DNA分子至SEQ ID NO.8所示单链DNA分子，所述SEQ IDNO.1所示单链DNA分子的名称为vWA-F，所述SEQ ID NO.1所示单链DNA分子的序列为GCCCTAGTGGATGATAAGAATAATCAGTATGTG；所述SEQ ID NO.2所示单链DNA分子的名称为vWA-R，所述SEQ ID NO.2所示单链DNA分子的序列为GGACAGATGATAAATACATAGGATGGATGG；所述SEQ IDNO.3所示单链DNA分子的名称为D8S1179-F，所述SEQ ID NO.3所示单链DNA分子的序列为ATTGCAACTTATATGTATTTTTGTATTTCATG；所述SEQ ID NO.4所示单链DNA分子的名称为D8S1179-R，所述SEQ ID NO.4所示单链DNA分子的序列为TTACCAAATTGTGTTCATGAGTATAGTTTC；所述SEQ ID NO.5所示单链DNA分子的名称为TPOX-F，所述SEQ ID NO.5所示单链DNA分子的序列为GACTGGCACAGAACAGGCACTTAGGGAACC；所述SEQID NO.6所示单链DNA分子的名称为TPOX-R，所述SEQ ID NO.6所示单链DNA分子的序列为AAACGTGAGGTTGACTCTACTGTCCTGGG；所述SEQ ID NO.7所示单链DNA分子的名称为FGA-F，所述SEQ ID NO.7所示单链DNA分子的序列为TTGAACTCACAGATTAAACTGTAACCAA；所述SEQ IDNO.8所示单链DNA分子的名称为FGA-R，所述SEQ ID NO.8所示单链DNA分子的序列为GCTGGATATGCTGTACTTTTTCTATGAC。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测STR位点的试剂盒，其特征在于：所述步骤一中引物组的终浓度均为0.1～0.2umol/L。

4.根据权利要求3所述的一种用于检测STR位点的试剂盒，其特征在于：所述步骤二中所述试剂包括对照标准品由22个条带组成，所述条带的大小为从60bp到600bp，所述条带60-200bp的片段间隔为20bp，所述条带200-500bp的片段间隔为25bp，所述条带500-600bp的片段间隔为50bp，即所述皮带大小分别为60bp、80bp、100bp、120bp、140bp、160bp、180bp、200bp、225bp、250bp、275bp、300bp、325bp、350bp、375bp、400bp、425bp、450bp、475bp、500bp、550bp和600bp，所述皮带为100bp的片段具有的荧光强度为其他片段的两倍以简化大小分配。

5.根据权利要求4所述的一种用于检测STR位点的试剂盒，其特征在于：所述步骤三中试剂盒包括冻干酶粉管、再水化缓冲液、醋酸镁溶液和备用试剂，所述醋酸镁溶液的浓度为260～280mmol/L。

6.根据权利要求1-5所述的一种用于检测STR位点的试剂盒的检测方法，其特征在于：

(1)以待测样品的基因组DNA为模板，采用步骤三所述试剂盒，向含有冻干酶粉的0.2mL反应管中加入再水化缓冲液28.5～29.5uL，溶解后得混合物，取5.7～5.9ul混合物加入到另外0.2ml的新管中，加0.5～1uL的去离子水和0.1～0.2uL的引物组，最后再加入0.3～0.5uL醋酸镁溶液，得RPA扩增体系；

(2)将所述RPA扩增体系充分混匀，置于35～37℃的金属浴或水浴锅上反应20～30min，得到RPA扩增产物；

(3)反应结束后将扩增产物使用PCR产物纯化试剂盒进行纯化并回收纯化后的产物，得纯化产物；

(4)使用毛细管电泳进行检测条带大小，计算位点分型。