[发明专利]一种定量免疫检测方法

权利要求书

1.一种定量免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）在已经经过羧基化改性过的聚苯乙烯微球上包被抗体，制备成检测试剂；

（b）将待测样本与检测试剂混合，检测试剂中的微球发生聚集反应；

（c）通过粒径仪测量初始和反应后的聚苯乙烯微球粒径和数量，比较粒径范围内微球数量的变化。

2.根据权利要求1所述的一种定量免疫检测方法，其特征在于，步骤（c）中所述微球数量的变化定义为损失粒子比例，为（初始粒子数量-反应后粒子数量）/初始粒子数量。

3.根据权利要求1所述的一种定量免疫检测方法，其特征在于，步骤（a）具体包括：

（a1）微球活化：取已经经过羧基化改性过的、粒径为0.5-3μm的聚苯乙烯微球制备成溶液，再加入EDAC和NHS水溶液，混合后室温静置，高速离心弃去上清液，再将沉淀的聚苯乙烯微球用MES缓冲液重悬；

（a2）交联抗体：将待测样本的抗体交联到（a1）得到的聚苯乙烯微球表面；

（a3）封闭：将（a2）中交联好的聚苯乙烯微球中加入BSA溶液，搅拌、离心弃去上清液，将沉淀物用MES缓冲液重悬，制备得到检测试剂。

4.根据权利要求3所述的一种定量免疫检测方法，其特征在于，步骤（a2）中所述交联包括通过羧基进行交联和利用物理方式进行吸附。

5.根据权利要求3所述的一种定量免疫检测方法，其特征在于，步骤（a2）具体为：将待测样本的抗体加入步骤（a1）得到的聚苯乙烯微球溶液中，25-45℃水浴搅拌3-5小时，高速离心弃去上清液，再将沉淀物用MES缓冲液重悬。

6.根据权利要求2所述的一种定量免疫检测方法，其特征在于，配制不同浓度的待测样本标准溶液分别上粒径仪测试，得出对应的损失粒子比例，以待测样本标准溶液浓度为X轴，损失粒子比例为Y轴，绘制标准曲线，根据待测样品的损失粒子比例，查曲线得出相应的浓度。