[发明专利]一种原玻璃蝇节杆菌CDA2-2-2及其产几丁质脱乙酰酶的方法

说明书

本发明公开了一种原玻璃蝇节杆菌CDA2‑2‑2及其产几丁质脱乙酰酶的方法，该菌株为革兰氏阳性短杆菌，并于2018年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC NO.16932，其16S rDNA序列的GenBank登录号为MH978647，并公开利用菌株CDA2‑2‑2产几丁质脱乙酰酶的方法，本发明获得更高发酵水平的几丁质脱乙酰酶，利用来自海洋的原玻璃蝇节杆菌制备，相较于现有陆源真菌，产酶水平高，催化温度温和，具有更高的经济价值和社会价值，值得推广。

技术领域

本发明涉及微生物领域，尤其是一种原玻璃蝇节杆菌CDA2-2-2及其产几丁质脱乙酰酶的方法。

背景技术

几丁质是地球上仅次于纤维素的可再生多糖，普遍存在于无脊椎动物的外骨骼、角质层及真菌的细胞壁中，壳聚糖是几丁质分子中乙酰基被部分或全部脱除后的产物，因其分子中有大量游离的氨基，故其溶解性能相比几丁质得到很大改善，并具有生物可降解性，广泛用于食品、医药、轻工、印染、环保和农业等领域。目前，工业上制备壳聚糖的方法主要是热浓碱脱除乙酰基，存在严重的环境污染问题，且获得的壳聚糖产品中乙酰基的脱除程度不一致。

酶法生产壳聚糖作反应条件温和，能耗值相对较低，可获得脱乙酰程度均一稳定的产品，因此，运用几丁质脱乙酰酶生产壳聚糖将是行业未来的发展方向。目前公开的几丁质脱乙酰酶多为陆源真菌，产酶水平较低，催化最适温度较高，少数报道的细菌来源的几丁质脱乙酰酶只能催化几丁寡糖脱乙酰基，不能催化晶体几丁质脱乙酰基；另外，细菌在发酵产酶方面较真菌更具优势，因此，获得发酵水平较高产几丁质脱乙酰酶细菌为利用酶法工业化催化制备壳聚糖奠定基础。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种来自于海洋的原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)CDA2-2-2以及该菌株用于产几丁质脱乙酰酶的方法，该原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)CDA2-2-2，于2017年9月5日自连云港市高公岛海域海泥筛选获得，且该菌株已于2018年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.16932，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，该菌株16S rDNA序列的GenBank登录号为MH978647，其具体技术方案如下：

一种原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)CDA2-2-2，其特征在于：该菌株为革兰氏阳性短杆菌，无芽孢，在2216E培养基上生长，菌落呈圆形，黄色半透明，表面湿润，边缘规则，无晕环，中央突起，直径0.1-0.5mm，易挑取；在含有对硝基-N-乙酰苯胺和粉末几丁质的筛选培养基上能够产生黄色透明圈，该菌株氧气、革兰氏染色、明胶水解、接触酶、过氧化氢酶、吲哚试验、葡萄糖发酵均呈阳性，芽孢、鞭毛染色、淀粉水解、硝酸盐还原、产H2S均为阴性，所述原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)CDA2-2-2于2018年12月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNO.16932，其16S rDNA序列的GenBank登录号为MH978647。

一种原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)CDA2-2-2产几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)制备种子培养基和发酵培养基；

(2)将原玻璃蝇节杆菌(Arthrobacter protophormiae)CDA2-2-2接种至种子培养基中进行培养，获取种子液；

(3)将种子液以3％的接种量接种于发酵培养基中，培养获取几丁质脱乙酰酶。

进一步的，所述种子培养基采用陈海水配置，pH为7.0，其成分还包括酵母粉0.1％，蛋白胨0.5％。