[发明专利]一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒，其特征在于：

包括5对通用性引物、PCR反应混合液、饱和荧光染料、双蒸水、动物源性成分的基因组DNA及哺乳动物鉴别标准图谱；

所述的通用性引物具体序列为：

97bp对应的引物序列为：

上游引物：5'- CAGACATCTGGTTCTTTCTTCAGGGC -3'；

下游引物：5'-GGGCTGATTAGTCATTAGTCCAT -3'；

100bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-AGGATCCATTGGAGGGCAAGT-3'；

下游引物：5'-TCCAACTACGAGCTTTTTAACTGCA-3'；

140bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-TCCCAGTACGAAAGGACAAGA-3'；

下游引物：5'-CAATTACCGGGCTCTGCCA-3'；

180bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-AGCCTGAGAAACGGCTACC-3'；

下游引物：5'-TGCTGGCACCAGACTTGCC-3'；

230bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-ACAAGACGAGAAGACCC-3'；

下游引物：5'-GATTGCGCTGTTATCCC-3'。

2.根据权利要求1所述的一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒，其特征在于：所述动物源性成分的基因组DNA为黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊、兔、马、驴、猪、狗、猫、鼠、狐、貂、貉。

3.一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解的检测方法，其特征在于：

具体包括以下步骤：

1）参考黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊、兔、马、驴、猪、狗、猫、鼠、狐、貂、貉15种哺乳动物的基因序列，设计筛选5对通用引物，所述的通用性引物具体序列为：

97bp对应的引物序列为：

上游引物：5'- CAGACATCTGGTTCTTTCTTCAGGGC -3'；

下游引物：5'-GGGCTGATTAGTCATTAGTCCAT -3'；

100bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-AGGATCCATTGGAGGGCAAGT-3'；

下游引物：5'-TCCAACTACGAGCTTTTTAACTGCA-3'；

140bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-TCCCAGTACGAAAGGACAAGA-3'；

下游引物：5'-CAATTACCGGGCTCTGCCA-3'；

180bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-AGCCTGAGAAACGGCTACC-3'；

下游引物：5'-TGCTGGCACCAGACTTGCC-3'；

230bp对应的引物序列为：

上游引物：5'-ACAAGACGAGAAGACCC-3'；

下游引物：5'-GATTGCGCTGTTATCCC-3'；

2）以不同的哺乳动物基因组DNA为模板，利用步骤1）所设计的通用引物进行PCR扩增；

3）将步骤2）扩增产物进行高分辨熔解分析，采集不同动物种类在不同的通用引物扩增下的熔解温度特征信息，经过统计学方法处理，建立15种哺乳动物鉴别标准图谱；

4）以待检测样本中的DNA为模板，按照步骤2）和步骤3）的方法进行判别分析，将分析结果与标准图谱中相应物种的分布位置作对比，从而确定样品中的动物源性成分。

4.根据权利要求3所述的一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解的检测方法，其特征在于：

所述的PCR扩增反应体系包括2×Taq PCR Master Mix、饱和荧光染料、引物、不同动物的DNA模板以及双蒸水。

5.根据权利要求4所述的一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解的检测方法，其特征在于：

所述步骤2）中PCR扩增反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性15s，58℃退火20s，72℃延伸30s，再延伸5min。