[发明专利]一种AHPND致病性副溶血弧菌RPA-LFS快速检测方法的建立及应用

权利要求书

1.一种AHPND致病性副溶血弧菌RPA-LFS快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)引物、探针设计及筛选：

上游引物：5’-CATCTTTGACGGAATTTAACCCTAACAAT

下游引物：5’-Biotin-TAACTAAACCTATGTAATGATCTTTTG

探针：5’-FITC-ATGAGCCAGCTATTGATAATATTTGGGAAC[THF]ATTACGTGACTGAAT-SpC3。

2)RPA-LFS种间特异性检测。

3)反应温度。

4)反应时间。

5)RPA-LFS最低检出限测定。

2.根据权利要求1所述的一种AHPND致病性副溶血弧菌RPA-LFS快速检测方法的应用，其特征在于：

引物探针筛选探针长度46bp；

探针5’末端用FITC进行标记，3’末端引入3C-spacer进行末端封闭，在探针中间引入THF，即无嘌呤无嘧啶位点(AP位点)；AP位点前至少要保留30bp的碱基，AP位点之后至少有15bp的碱基；

下游引物的5’末端标记生物素，探针和下游引物扩增产物的一端带有FITC，另一端带有生物素。

3.根据权利要求1所述的一种AHPND致病性副溶血弧菌RPA-LFS快速检测方法的应用，其特征在于，RPA-LFS初步应用检测，从凡纳滨对虾养殖场采取对虾，养殖水共75个样本用RPA-LFS检测方法检测，同时用AP4方法做对标，65个对虾样本中有20个样本检测为阳性，10个养殖水样本中有3个样本检测为阳性，该结果与AP4检测方法一致，符合率为100％。