[发明专利]一种促肝细胞生长素的制备方法

说明书

本发明涉及促肝细胞生长素技术领域，尤其是涉及一种促肝细胞生长素的制备方法，包括以下步骤：S1.乳猪肝预处理；S2.酶解处理：将步骤S1得到的乳猪肝匀浆加蒸馏水配置成底物，调节pH值，水浴加热，然后加入沉淀剂和中性蛋白酶，得酶解液；S3.灭活、离心；S4.将步骤S3得到的离心液先经过截留分子量为100kDa的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再用截留分子量为6～10kDa的超滤膜进行超滤，滤液减压浓缩，得促肝细胞生长素。本发明提供一种促肝细胞生长素的制备方法，操作简单、条件温和，成本低廉、促肝细胞生长素产量高、活性佳、耗时短、工作效率高、且适于工业化生产。

技术领域

本发明涉及促肝细胞生长素技术领域，尤其是涉及一种促肝细胞生长素的制备方法。

背景技术

促肝细胞生长素(pHGF,Hepatocyte Growth-promoting Factor)，是一种从胎肝或再生肝中发现和分离的肝源性肝细胞生长因子，为小分子多肽与氨基酸的混合物。促肝细胞生长素能特异性促进肝细胞DNA合成和细胞分裂，稳定肝细胞膜，减轻肝细胞坏死，调节机体免疫功能，降低胆红素及羧甲基纤维素钠含量，抗肝纤维化，活跃肝细胞生物氧化功能和蛋白质合成作用，同时可改善肝脏微循环，临床上应用于各种重型病毒性肝炎(急性、亚急性、慢性重症肝炎的早期或中期)的辅助治疗。促肝细胞生长素具有年龄依耐性，器官特异性，无种属特异性，还具有耐热，易溶的特点。

目前促肝细胞生长素的制备方法主要为反复冻融法和酸水解法，以新鲜乳猪或乳牛肝脏为原料，其中采用反复冻融法时，反复冷冻与融化细胞中形成的冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂，释放出蛋白质，并降解为多肽，再通过超滤除去大分子物质，真空低温浓缩，得到促肝细胞生长素液，虽然制备的多肽活性较高，但是反复冻融法耗时长，工作效率低，制备得到的多肽收率低；其中采用酸水解法时，用盐酸调pH值为(3.2±02)，于-25℃冷冻，通过水浴解冻，用氢氧化钠调节pH值，再水浴加热，冷却，离心沉淀，上清液进行超滤，得促肝细胞生长素液，虽然酸水解法成本较低，制备的多肽收率高，但是多肽的活性较低。

因此，亟需一种成本低廉、促肝细胞生长素产量高、活性佳、工作效率高、耗时短且适于工业化生产的促肝细胞生长素的制备方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种促肝细胞生长素的制备方法，操作简单、条件温和，具有成本低廉、促肝细胞生长素产量高、活性佳、工作效率高、耗时短且适于工业化生产的优点。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种促肝细胞生长素的制备方法，包括以下步骤：

S1.乳猪肝预处理：取乳猪肝脏，去筋膜、结缔组织，用水洗净，切成2～5cm小块，称重，按1:(0.5～3)(W/V)加入纯化水，置于高速组织匀浆机中搅拌成粒径为0.5～2mm的乳猪肝匀浆；

S2.酶解处理：将步骤S1得到的乳猪肝匀浆加蒸馏水配置成质量浓度为1～9％的底物，调节底物的pH值，水浴加热，然后加入沉淀剂和1000～5000U/g中性蛋白酶，在40～60℃温度下恒温磁力搅拌酶解，得酶解液；

S3.灭活、离心：将步骤S2得到的酶解液在70～100℃水浴保温，然后冷却至室温，再进行离心得离心液；

S4.将步骤S3得到的离心液先经过截留分子量为100kDa的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再用截留分子量为6～10kDa的超滤膜进行超滤，滤液减压浓缩，即得促肝细胞生长素。

优选地，所述沉淀剂包括L-岩藻糖和羧甲基纤维素钠。

更优选地，所述L-岩藻糖和羧甲基纤维素钠的质量比为(2～3.5):1。

优选地，所述步骤S2中用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠调节底物的pH值为6～8。