[发明专利]一种促肝细胞生长素的制备方法

权利要求书

1.一种促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.乳猪肝预处理：取乳猪肝脏，去筋膜、结缔组织，用水洗净，切成2～5cm小块，称重，按1: 0.5～3 (W/V)加入纯化水，置于高速组织匀浆机中搅拌成粒径为0.5～2mm的乳猪肝匀浆；

S2.酶解处理：将步骤S1得到的乳猪肝匀浆加蒸馏水配置成质量浓度为1～9％的底物，调节底物的pH值，水浴加热，然后加入沉淀剂和1000～5000U/g中性蛋白酶，在40～60℃温度下恒温磁力搅拌酶解，得酶解液；

S3.灭活、离心：将步骤S2得到的酶解液在70～100℃水浴保温，然后冷却至室温，再进行离心得离心液；

S4.将步骤S3得到的离心液先经过截留分子量为100kDa的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再用截留分子量为6～10kDa的超滤膜进行超滤，滤液减压浓缩，即得促肝细胞生长素；

所述沉淀剂包括L-岩藻糖和羧甲基纤维素钠；

所述L-岩藻糖和羧甲基纤维素钠的质量比为2～3.5:1。

2.根据权利要求1所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠调节底物的pH值为6～8。

3.根据权利要求2所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠调节底物的pH值为6.5。

4.根据权利要求1所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中水浴加热的温度为40～60℃，水浴加热时间为5～10min。

5.根据权利要求1所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S2酶解时间为1～3.5h。

6.根据权利要求1所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中酶解液在70～100℃水浴保温5～20min。

7.根据权利要求1所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S3离心速度为3000～5000r/min，离心时间为10～20min。

8.根据权利要求1所述的促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，所述步骤S4滤液在60～90℃条件下减压浓缩。