[发明专利]超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法

说明书

本发明涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法，前处理过程简单，成本低，且灵敏度高、特异性强，5min之内完成抗血小板药物的分离和检测，准确度与精密度基本满足要求，可用于临床上抗血小板药物的定量分析，为临床上抗血小板药物的治疗浓度监测提供一种可靠的检测方法。

技术领域

本发明属于血浆检测技术领域，具体涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法，具体药物为：替格瑞洛(Ticagrelor，TIC)、去羟乙氧基替格瑞洛(Deshydroxyethoxy Ticagrelor，DHTIC)、阿司匹林(Acetylsalicylic acid，ASA)、水杨酸(Salicylic acid，SA)、氯吡格雷(Clopidogrel，CLOP)和氯吡格雷羧酸代谢物(Clopidogrel Carboxylic Acid，CLOPC)。

背景技术

阿司匹林是一种常用的非甾体类药物，最初被用于解热镇痛，后来研究发现小剂量使用阿司匹林可以对血小板的聚集产生抑制作用，使血小板的粘附率降低，从而阻止血栓的形成，口服阿司匹林75mg被作为预防用药，被广泛用于缺血性心血管疾病的预防，同时低剂量使用时可用于心梗患者。作为预防用药常常需要长期使用，研究发现长期使用阿司匹林会增加出血、减少中性粒细胞等风险。阿司匹林在体内可以迅速代谢为水杨酸，导致体内阿司匹林含量较低，两种化合物浓度相差太大也给同时检测两种化合物造成很大的困难。传统的LC-MS方法和LC-UV的方法均不能同时检测两种物质。LC-MS/MS方法可以同时检测到体内的两种化合物。

替格瑞洛(TIC)是一种环戊基三唑嘧啶类药物，是一种独特的血小板聚集抑制剂，对P2Y12受体具有强效抑制作用，对ADP(二磷酸腺苷)诱导的血小板聚集反应能产生可逆的抑制作用，且具有一定的浓度依赖性。常被用于治疗抗血小板、降低胆固醇、控制血糖、控制血压等。TIC及其主要代谢物去氧乙基替格瑞洛(DHTIC)均表现出抗血小板特性，30-40％的吸收剂量的主要代谢物多为患者耐受良好，常被报道不良反应包括头晕、恶心、胸痛、呼吸困难和出血。与他汀类药物联用时可能会导致肌肉相关不良事件的风险增加。但是，与其他药物联合应用可能会有一定的效果导致危及生命的相互作用。因此,调查这些化合物的浓度在临床样本是必要的，因此需要开发一种同时测定TIC、及其代谢物的足够精确的方法。

氯吡格雷(CLOP)是一种噻吩并吡啶类衍生物，可以选择性的抑制二磷酸腺苷(ADP)与血小板受体的结合及继发ADP介导的糖蛋白GPI-Ib/IIIa复合物的活化，还能阻断其他种类胡激动剂通过释放ADP引起胡血小板活性的增强，最终达到抑制血小板聚集的目的。常被应用于中风近期发作的患者，以及心肌梗死肯确诊外周动脉疾病的患者，最终减少动脉粥样硬化事件的发生。氯吡格雷是一种前体药物，原形药物没有活性，前体药物主要经过肝脏进行代谢，其羧酸类代谢物(CLOPC)在血浆中药物相关化合物的85％，最高浓度出现时间约为在服药后1h出现，氯吡格雷及其代谢物在不同个体间浓度差异较大，因此需要进行准确的药物浓度监测。

目前综合分析国内外文献和专利，对这几种抗血小板药物的检测只是同时检测一种或者两种化合物，尚无同时检测这六种化合物的报道。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法。

本发明的技术方案如下：

一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法，

所述抗血小板药物分别为：替格瑞洛(TIC)、去羟乙氧基替格瑞洛(DHTIC)、阿司匹林(ASA)、水杨酸(SA)、氯吡格雷(CLOP)和氯吡格雷羧酸代谢物(CLOPC)；

上述抗血小板药物对应的同位素内标物分别为：替格瑞洛-d7(TIC-d7)、去羟乙氧基替格瑞洛-d7(DHTIC-d7)、阿司匹林-d4(ASA-d4)、水杨酸-d4(SA-d4)和氯吡格雷-d4(CLOP-d4)；