[发明专利]超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法

权利要求书

1.一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中抗血小板药物的方法，

所述抗血小板药物分别为：替格瑞洛、去羟乙氧基替格瑞洛、阿司匹林、水杨酸、氯吡格雷和氯吡格雷羧酸代谢物；

上述抗血小板药物对应的同位素内标物分别为：替格瑞洛-d7、去羟乙氧基替格瑞洛-d7、阿司匹林-d4、水杨酸-d4和氯吡格雷-d4；

采用超高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血浆中的上述抗血小板药物，先利用超高效液相色谱将目标待测物与血浆基质中的干扰组分进行分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算血浆中抗血小板药物的含量，具体色谱条件为：

（1）超高效液相色谱条件：

流动相A：0.004%甲酸水溶液；流动相B：乙腈；

色谱柱型号：Waters BEH C18；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱过程如下：在0.0-1.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由95:5匀速渐变至40:60；在1.0-2.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由40:60匀速渐变至2:98；在2.0-3.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比为2:98；在3.0-5.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由2:98匀速渐变至95:5；

（2）质谱条件：

在电喷雾电离（ESI）模式下，采用多反应监测（MRM）进行正负切换扫描；喷雾电压为3.0kV ESI+ /2.5kV ESI-；去溶剂温度为120℃；雾化气温度为500℃，雾化气流速为800 L/h，锥孔气流速为150 L/h；同时监测了各目标物及其对应同位素内标；

所述经过预处理的血浆按照如下方法制备：取50 μL血浆于1.5 mL离心管中，向其中加入200 μL含内标的蛋白沉淀剂，在12000~15000 r/min，1~5℃离心4~10min后，取60 μL上清液；所述蛋白沉淀剂中甲醇与乙腈的体积比1:4；

所述含内标的蛋白沉淀剂按照如下方法制备：将150 μg/mL替格瑞洛-d7同位素内标母液、150 μg/mL去羟乙氧基替格瑞洛-d7同位素内标母液、200 μg/mL阿司匹林-d4同位素内标母液、200 μg/mL水杨酸-d4同位素内标母液和2 μg/mL氯吡格雷-d4同位素内标母液以乙腈水溶液配制成包含有1500 ng/mL替格瑞洛-d7、1500 ng/mL去羟乙氧基替格瑞洛-d7、2000 ng/mL阿司匹林-d4、2000 ng/mL水杨酸-d4和20 ng/mL氯吡格雷-d4的混合内标溶液；取200 µL混合内标溶液，加入19.8 mL蛋白沉淀剂，混合均匀得含内标的蛋白沉淀剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流速为0.2~0.5 mL/min；柱温为35~45℃；进样体积为1~5 µL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流速为0.3 mL/min；所述柱温为40℃；所述进样体积为1 µL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血浆为人或动物血浆。