[发明专利]一种利用固氮酶nif基因鉴定满江红叶腔中共生固氮蓝藻的方法

权利要求书

1.一种利用固氮酶nif基因鉴定满江红叶腔中共生固氮蓝藻的引物，其特征在于：所述引物为：nifH-F：5'-AAAGGYGGWATCGGYAARTCCACCAC-3'；nifH-R：5'-TTGTTSGCSGCRTACATSGCCATCAT-3'。

2.一种利用固氮酶nif基因鉴定满江红叶腔中共生固氮蓝藻的方法，其特征在于：所述方法包括如下：

（1）对满江红样本表面消毒除菌处理；

（2）满江红DNA提取与PCR扩增

用植物基因组提取试剂盒分离提取样本的DNA，以提取的满江红基因组DNA为模板，以nifH基因序列作为扩增的目标区域片段，引物序列为nifH-F：5'-AAAGGYGGWATCGGYAARTCCACCAC-3'；nifH-R：5'-TTGTTSGCSGCRTACATSGC CATCAT-3'；反应体系20μl：4 μl 的5×FastPfu Buffer；2 μl 的2.5 mM dNTPs；各0.8 μl的5 μM ForwardPrimer及nifH基因Reverse Primer；0.4 μl TransStart FastPfu Polymerase；0.2 μlBSA；10 ng Template DNA；补ddH₂O至20 μl；PCR反应参数：1× (3 minutes at 95℃)；35循环× (30 seconds at 95℃；30 seconds at；45 seconds at 72℃) ，循环退火温度55℃；10 minutes at 72℃；PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测后，对nif基因的扩增序列进行高通量测序；

（3）数据处理与生物信息学分析。