[发明专利]一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法

说明书

本发明公开了一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法，涉及PCR反应领域，包括S1、采集每个样品在PCR反应过程中多个循环的荧光数据，得到每个样品的循环数—荧光亮度值的曲线A；S2、处理S1中的所有荧光数据，使每个样品的曲线A变得平滑得到曲线B；S3、获取每个样品的曲线B的基线并进行基线校准；S4、根据校准后的基线得到每个样品的Ct值；该方法从数据层面入手，通过一系列算法步骤，明显消除反应、加温、信号采集等对原始数据的影响，从而完成最终的分析，计算出待测样品的Ct值和浓度，定量分析的结果准确度。

技术领域

本发明涉及PCR反应领域，尤其涉及一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法。

背景技术

QPCR实时荧光数据，通过各种类型传感器捕获后，需要对数据进行一系列分析以确定待测样本的浓度。实际中，由于PCR反应本身、温度控制、采集过程等各方面的误差，会导致最终采集结果出现不同程度偏移，使S曲线的形状变得不规则，定量分析的结果Ct值准确度受到影响。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题设计了一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法，包括以下步骤：

S1、采集每个样品在PCR反应过程中多个循环的荧光数据，得到每个样品的循环数—荧光亮度值的曲线A；

S2、处理S1中的所有荧光数据，使每个样品的曲线A变得平滑得到曲线B；

S3、获取每个样品的曲线B的基线并进行基线校准；

S4、根据校准后的基线得到每个样品的Ct值。

进一步地，在S2中包括：

S21、确定平滑窗口，平滑窗口为3或5；

S22、第一个循环开始取滑动窗口数量的点数，使用平均值代替对应的采集值，使得每个样品的曲线A变成平滑的曲线B。

进一步地，在S3中包括：

S31、对每个样品的曲线B中的数据连续两点做差分,标记差分值最大的点m；

S32、从m点往前计算该点和前一的差值；

S33、若差值大于0.1则m点往前移动，直到第一个点；

S34、停止后的点为m为基线终点，标识第一个循环到第m个循环为曲线B的基线期；

S35、取第1个点到第m个点为基线数据集做线性拟合,计算出基线解析式y＝ax+b

S36、曲线B上每一个点纵坐标减去对应校准后基线的纵坐标求得deltaRn。

进一步地，在S4中包括：

S41、取每条线校准荧光值deltaRn和对应循环数作为曲线新的坐标对,计算基线期所有点的10倍标准差作为阈值；

S42、取所有样品的阈值的最小值作为自动阈值；

S43、根据自动阈值与每个样品校准后的基线计算Ct值。

本发明的有益效果在于：本发明实现了一种QPCR数据处理方法，该方法从数据层面入手，通过一系列算法步骤，明显消除反应、加温、信号采集等对原始数据的影响，从而完成最终的分析，计算出待测样品的Ct值和浓度，定量分析的结果准确度。

附图说明

图1是本发明一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法中曲线A的曲线图；

图2是本发明一种QPCR实时荧光数据定量分析的方法中基线校准后的曲线图。