[发明专利]一种用于人类辅助生殖的颗粒细胞去除液及其制备方法

说明书

一种用于人类辅助生殖的颗粒细胞去除液及其制备方法，用于处理卵子的颗粒细胞的透明质酸酶溶解于含有聚乙烯吡咯烷酮、抗菌素和人血白蛋白的盐溶液中配制而成；其中包含：氯化钠95.00～105.00mmol/L、氯化钾3.45～6.55mmol/L、硫酸镁0.55～0.65mmol/L、氯化钙1.75～2.22mmol/L、磷酸二氢钠0.18～0.39mmol/L、碳酸氢钠3.85～5.45mmol/L、HEPES和MOPS15.00～25.00mmol/L、葡萄糖0.38～0.68mmol/L、丙酮酸钠0.28～0.42mmol/L、乳酸钠12.48～23.68mmol/L、谷氨酰胺0.32mmol/L～0.84mmol/L、非必需氨基酸5～15mmol/L、人血白蛋白5～15mg/mL、硫酸庆大霉素7～14μg/mL、聚乙烯吡咯烷酮2～6g/L、透明质酸酶30～90IU/ml；制备方法为：称量好各种组分并溶于注射级用水中，并经0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；使pH值：7.00～7.40；渗透压：250～310mOsm/Kg；细菌内毒素：＜0.25EU/ml；1细胞鼠胚培养到96h：≥80％的囊胚形成率。

技术领域

本发明涉及辅助生殖卵丘细胞与卵子的分离技术，具体涉及一种用于人类辅助生殖的颗粒细胞去除液及其制备方法。

背景技术

透明质酸酶已广泛应用于辅助生殖技术中。其目的是分离卵子周围的卵丘细胞(即颗粒细胞)。透明质酸酶的预期用途：用于卵子显微注射和卵子冷冻之前的卵丘细胞与卵子的分离。

卵子胞浆单精子注射(ICSI)或者卵子冷冻技术中，卵子必须与其周围的卵丘细胞(即颗粒细胞)中分离以便观察卵子的成熟和质量。颗粒细胞分散在粘稠的透明质酸中，透明质酸是一种粘多糖，而“消化”这道屏障的武器就是透明质酸酶。透明质酸酶(hyaluronidase)是能使透明质酸产生低分子化作用酶的总称，一种能够降低体内透明质酸的活性，从而提高组织中液体渗透能力的酶。透明质酸酶可以有效地消化颗粒细胞间的透明质酸，以便通过剥卵吸管(针)机械地去除卵子周围的颗粒细胞，随后实施单精子注射或者卵子冷冻技术。

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)简称PVP，是一种非离子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺类聚合物中最具特色的，且被研究得最深、广泛的精细化学品品种。PVP有优良的生理惰性，不参与人体新陈代谢，又具有优良的生物相容性，对皮肤、粘膜、眼等不形成任何刺激。医药级PVP为国际倡导的三大药用新辅料之一，可用做片剂、颗粒剂的粘结剂、注射剂的助溶剂、胶囊的助流剂；眼药的去毒剂，延效剂，润滑剂和包衣成膜剂，液体制剂的分散剂和酶及热敏药物的稳定剂，还可用做低温保存剂。

辅助生殖技术中的颗粒细胞去除液中发挥作用的成份为透明质酸酶。而我国的颗粒细胞去除液几乎完全依赖进口成品，不仅成本高，且溶液经长途运输和海关检查后，其有效性受到不同程度的影响，甚至变质，如果使用低质或变质的溶液，将对辅助生殖的治疗带来不可逆转的后果和风险。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种更优良的用于人类辅助生殖的颗粒细胞去除液。

本发明的另一的目的是，提供一种用于人类辅助生殖的颗粒细胞去除液的制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

一种用于人类辅助生殖的颗粒细胞去除液，用于处理卵子的颗粒细胞的透明质酸酶溶解于含有聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl Pyrrolidone,PVP)、抗菌素和人血白蛋白的盐溶液中配制而成。

优选的，所述透明质酸酶为透明质酸酶(羊睾丸)，浓度为30～90IU/ml。

优选的，所述聚乙烯吡咯烷酮为PVP-K30，浓度为2～6g/L。

优选的，所述抗菌素为硫酸庆大霉素,浓度为7～14μg/ml。