[发明专利]复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法

说明书

本发明涉及一种复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法，它包括以下步骤：乙酰半胱氨酸对照品和乙酰酪氨酸对照品溶液配制、供试品溶液配制、确定色谱条件、对对照品溶液进行高效液相色谱检测并记录峰面积、对供试品溶液进行高效液相色谱检测并记录峰面积，再采用外标法计算供试品中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量。本发明采用耐水反相色谱柱，以硫酸水溶液与乙腈相结合作为流动相，梯度洗脱，达到同时对复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸的含量进行测定的目的。该方法操作简单、色谱柱平衡快、专属性好、准确性佳、重现性好。

技术领域

本发明涉及一种检测乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的方法，具体涉及到一种利用HPLC检测复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的方法。

背景技术

乙酰半胱氨酸、乙酰酪氨酸是复方氨基酸注射液中两个含有乙酰基的主成分，由于该基团易水解，无法使用现有的衍生法检测其含量。乙酰半胱氨酸极性强，紫外吸收弱，在普通C18色谱柱，和其他大部分组分一样，保留很弱，难分离。而乙酰酪氨酸由于结构中含有苯环，和C18作用力较强，与乙酰半胱氨酸相反，需要使用较强流动相才能洗脱。普通离子对色谱法保留时间不重现、色谱柱寿命短，亲水模式色谱法HILIC色谱柱较难平衡且分析时间较长，阳离子交换色谱柱对此两种成分专属性差。因此，如何使用同一个体系快速准确的检测出复方氨基酸注射液中二者的含量成为一个难点。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种操作简单、色谱柱平衡快、专属性好、准确性佳且重现性好的复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法。

按照本发明提供的技术方案，所述复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸含量的检测方法包括以下步骤：

步骤一、使用0.01～0.1mol/L盐酸作为溶剂配制浓度均为0.010mg/ml～0.080mg/ml的乙酰半胱氨酸对照品和乙酰酪氨酸对照品溶液；

步骤二、复方氨基酸注射液加溶剂0.01～0.1mol/L盐酸进行稀释后作为供试品溶液；

步骤三、确定色谱条件：

色谱柱：采用耐水反相色谱柱；

流动相：流动相A为pH值为3.0-3.5的硫酸水溶液；流动相B：流动相A与乙腈按体积比为70:30的比例混合；

线性梯度洗脱条件为：0～7分钟：100％流动相A、0％流动相B；7～7.1分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为70％流动相A、30％流动相B；7.1～20分钟：70％流动相A、30％流动相B；20～20.1分钟：由70％流动相A、30％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；20.1分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；

或者，线性梯度洗脱条件为：0～7分钟：100％流动相A、0％流动相B；7～7.1分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为60％流动相A、40％流动相B；7.1～17分钟：60％流动相A、40％流动相B；17～17.1分钟：由60％流动相A、40％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；17.1分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；

或者，线性梯度洗脱条件为：0～6.5分钟：100％流动相A、0％流动相B；6.5～8.5分钟：由100％流动相A、0％流动相B匀速变为70％流动相A、30％流动相B；8.5～20分钟：70％流动相A、30％流动相B；20～21分钟：由70％流动相A、30％流动相B匀速变为0％流动相A、100％流动相B；21～23分钟：0％流动相A、100％流动相B；23～24分钟：由0％流动相A、100％流动相B匀速变为100％流动相A、0％流动相B；24分钟以后：100％流动相A、0％流动相B；

流速：0.9-1.1mL/min；

柱温：23-30℃；