[发明专利]用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，旨在提供一种用于非洲猪瘟病毒抗体的大量筛查以及将来用于CD2v基因缺失株疫苗免疫猪群中鉴别非洲猪瘟野毒株的感染的检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心法免疫荧光层析检测试剂；其技术方案包括盒体，所述的盒体内设有CD2v蛋白抗体免疫荧光层析检测卡和装有血清稀释液的血清稀释液瓶，装有标准阳性血清的标准阳性血清瓶，装有标准阴性血清的标准阴性血清瓶；所述的CD2v蛋白抗体免疫荧光层析检测卡包括PVC底板，所述的PVC底板上从左至右依次设有吸收垫、反应膜、结合垫和样品垫，所述的结合垫上负载有荧光标记的CD2v蛋白和荧光标记的羊抗鸡IgY，所述的反应膜设有一条检测线T，一条质控线C，所述的检测线T上包被有重组CD2v蛋白，所述的质控C线上包被有羊抗鸡IgY免疫球蛋白。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)感染家猪和野猪引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，临床以猪高热、食欲废绝、皮肤发绀、内脏实质器官出血、呼吸系统和神经系统功能紊乱为主要特征，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病，在我国被列为一类动物疫病。该病病程极短、死亡率高。

非洲猪瘟病毒基因型众多，目前已知有24个基因型。迄今为止，该病尚无商品化的疫苗，疫情的防控主要依靠加强饲养场生物安全管理、限制生猪和猪产品跨区域流动、对疫点和疫区内所有生猪采取扑杀等措施。

1921年，Montgomery首次报道在肯尼亚发生非洲猪瘟疫情。2007年以来，非洲猪瘟在中东欧多个国家扩散并流行，特别是俄罗斯及其周边地区。2017年3 月，俄罗斯远东地区伊尔库茨克州发生非洲猪瘟疫情，2018年8月，我国辽宁省沈阳市沈北区首次发现非洲猪瘟疫情，经核酸检测和序列比对分析发现，该毒株与俄罗斯和中东欧国家流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)属于同一进化支，属于基因II型毒株。随后，在我国的河南、江苏、内蒙古、黑龙江、浙江、安徽、等多个省份(自治区、直辖市)呈现散发流行，对我国养猪业造成了数十亿元的经济损失。

由于ASF可给养猪业造成毁灭性打击，因此，ASF疫苗研究从未间断。迄今，国际上采用基因工程手段获得了多个ASFV基因缺失疫苗候选株，以及通过细胞传代致弱和从自然界分离弱毒株的方法获得了弱毒疫苗候选株，基因缺失株疫苗研究较多的是MGF和CD2v基因缺失株。国外2017年构建了CD2v缺失的 BA71株(基因I型)已经充分致弱，免疫猪后存活率均100％[Monteagudo，P.L.， et al.，BA71Delta CD2：A New Recombinant LiveAttenuated African Swine Fever Virus with Cross-Protective Capabilities.JVirol，2017.91(21).]。2019年国内构建了 CD2v和MGF双基因缺失株，能使免疫猪获得100％的保护[张艳艳，等，非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性，中国兽医学报，2019.39(8), 1421-1427]。2020年国内又构建了更安全有效的非洲猪瘟病毒7基因缺失疫苗株 [Weiye C.，et al.，A seven-gene-deleted African swine fever virus issafe and effective as a live attenuated vaccine in pigs.Sci China Life Sci,2020.63(3)]，在这些疫苗候选株中CD2v基因均为必缺基因，又因其为病毒的外膜蛋白并具有良好的免疫原性，使其成为建立鉴别诊断疫苗株与野毒株血清学诊断方法的首选靶抗原。我国的国情决定了现阶段应走疫苗免疫防控路线，随着疫苗的使用，鉴别疫苗株与野毒株的显得尤为重要，因此研制相关的快速诊断试剂盒十分迫切。

发明内容