[发明专利]用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，包括盒体(A)，其特征在于，所述的盒体(A)内设有CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)和装有血清稀释液的血清稀释液瓶(C)，装有标准阳性血清的血清瓶(D)，装有标准有阴性血清的标准血清瓶(E)；所述的CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)包括PVC底板(1)，所述的PVC底板(1)上从左至右依次设有吸收垫(2)、反应膜(3)、结合垫(4)和样品垫(5)，所述的结合垫(4)上负载有荧光标记的CD2v蛋白和荧光标记的羊抗鸡IgY，所述的反应膜(3)设有一条检测线T，一条质控线C，所述的检测线T上包被有重组CD2v蛋白，所述的质控C线上包被有羊抗鸡IgY免疫球蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述的CD2v抗体免疫荧光层析检测卡(B)位于卡壳(6)内，所述的卡壳(6)位于盒体(A)内，所述的卡壳(6)上设有加样孔(7)，所述的加样孔(7)与样品垫(5)相对应。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述的盒体(A)内设有ID芯片卡(8)，盒体(A)外设有ID芯片卡(8)相适配的二维码(9)。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述的反应膜通过下述方法制得的：

用含3％蔗糖的PB分别稀释CD2v蛋白和羊抗鸡IgY免疫球蛋白至浓度为1mg/ml，得检测线溶液和质控线溶液，在反应膜上划线，在膜的一端用记号笔做好质控线和检测线的标记，质控线和检测线的距离为5mm，检测T线与硝酸纤维素膜下缘的距离为10mm，划线浓度均为1μL/cm，完成后将片材放置在温度18～26℃、湿度≤30％的干燥室中干燥16～18h，干燥完迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口，2～8℃保存，待用。

5.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述的结合垫的通过下述步骤制得的：

1)将1mg纳米稀土荧光微球超声分散，用活化缓冲液MES稀释10倍，加入到2ml的EP管中；加入10mg的活化剂EDC和10mg的活化剂NHS混匀，活化15min-30min；14000r/min，离心15min；倒掉上清液，加入1ml偶联缓冲液，然后用超声波分散均匀，边搅拌边滴加CD2v蛋白或羊抗鸡IgY 100μg，室温混匀1小时，加入封闭剂封闭1小时，14000r/min，离心15min，去上清，加入复溶液分散均匀，即标记好的T线标记物或C线标记物；

2)将玻璃纤维膜裁剪为10mm*300mm大小，将标记好的T线标记物和C线标记物，按照体积比1:10比例混合，按3μl/cm、0.02MPa采用喷金划膜仪喷至剪裁后的玻璃纤维膜上，放置在18～26℃、湿度≤30％的干燥室中干燥16～18h，干燥完迅速装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口，2～8℃保存，待用。

6.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述的样品垫通过下述步骤制得的：配制含1wt％S9、0.5wt％曲拉通、0.05wt％叠氮钠的Tris样品垫工作液；按40ml/张RB65玻纤投料，每张用滚轮铺均匀，37℃干燥24h，用切刀裁为23mm*300mm大小，装到铝膜袋中，加入干燥剂，封口待用。

7.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体的双抗原夹心免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，所述的血清稀释液为含0.8wt％S21、0.03wt％Proclin300的0.01M的pH7.4磷酸盐缓冲液。