[发明专利]一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法及其分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种用于分离纯化α‑葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法及其分离纯化α‑葡萄糖苷酶的方法，所述亲和层析介质的制备方法包括以下步骤：S1、首先采用脱脂棉作为基质，经高碘酸钠溶液醛基化反应，制备得到醛基化脱脂棉；S2、其次将阿卡波糖作为亲和配基，偶联在步骤S1制备得到的醛基化脱脂棉上，制备得到偶联产物；S3、再次采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物，制备得到稳定的亲和层析介质；S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干，储存在乙醇溶液中备用。本发明提供的制备方法原料容易获得、价格低廉、操作简单、提纯方法稳定可靠、具有很大的应用前景和良好的经济、社会效益。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法及其分离纯化α-葡萄糖苷酶的方法。

背景技术

α-葡萄糖苷酶，又称葡萄糖基转移酶（α-glucosidase，EC.3.2.1.20），系统命名为α-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶。α-葡萄糖苷酶能催化α-1,4-糖苷键水解，使小肠内麦芽糖、蔗糖等寡糖水解。通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性，可使葡萄糖的生成及吸收减缓，降低餐后血糖峰值，调整血糖水平，在调节糖代谢的同时也调节了脂肪的生成，因此α-葡萄糖苷酶抑制剂成为近年来生物技术领域的研究热点。

传统的筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂方法主要是采用微生物（包括黑曲霉和酵母菌等）来源的商品化α-葡萄糖苷酶，这些酶与人体小肠的α-葡萄糖苷酶存在较大的差异性，并不完全适合用于α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选。也有部分研究者采用动物小肠来源α-葡萄糖苷酶粗酶液，试图代替商品化α-葡萄糖苷酶，以保证研究结果更加合理。由于动物小肠来源α-葡萄糖苷酶粗酶液中存在的其他生物大分子特别是蛋白酶类会严重影响α-葡萄糖苷酶的稳定性，使其难以长期保存，所以限制了动物小肠来源α-葡萄糖苷酶的广泛应用。因此，快速高效地从动物小肠中分离纯化α-葡萄糖苷酶，排除其他生物大分子特别是蛋白酶类的影响，对于α-葡萄糖苷酶在科学研究中的应用具有重要意义。

亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标产物得到分离纯化的液相层析法。亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为酶和其他蛋白质最有效的分离纯化技术之一。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，包括以下步骤：

S1、首先采用脱脂棉作为基质，经高碘酸钠溶液醛基化反应，制备得到醛基化脱脂棉；

S2、其次采用阿卡波糖作为亲和配基，偶联在步骤S1制备得到的醛基化脱脂棉上，制备得到偶联产物；

S3、再次采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物，制备得到稳定的亲和层析介质；

S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干，储存在乙醇溶液中备用。

其中，所述脱脂棉与所述高碘酸钠的质量比为100:1-5。

优选地，所述脱脂棉与所述高碘酸钠的质量比为100:1.5，100:2，100:2.5，100:3，100:3.5，100:4，100:4.5。

其中，所述醛基化脱脂棉与所述阿卡波糖的质量比为100:1-5。

优选地，所述醛基化脱脂棉与所述阿卡波糖的质量比为100:1.5，100:2，100:2.5，100:3，100:3.5，100:4，100:4.5。

其中，所述偶联产物与所述硼氢化钠的质量比为100:1-5。

优选地，所述偶联产物与所述硼氢化钠的质量比为100:1.5，100:2，100:2.5，100:3，100:3.5，100:4，100:4.5。