[发明专利]一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法及其分离纯化方法

权利要求书

1.一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、首先采用脱脂棉作为基质，经高碘酸钠溶液醛基化反应，制备得到醛基化脱脂棉，所述脱脂棉与所述高碘酸钠的质量比为100:1-5；

S2、其次采用阿卡波糖作为亲和配基，偶联在步骤S1制备得到的醛基化脱脂棉上，制备得到偶联产物，所述醛基化脱脂棉与所述阿卡波糖的质量比为100:1-5；

S3、再次采用硼氢化钠溶液还原步骤S2制备得到的偶联产物，制备得到稳定的亲和层析介质；

S4、最后将步骤S3制备得到的亲和层析介质用蒸馏水洗涤抽干，储存在乙醇溶液中备用。

2.根据权利要求1所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述偶联产物与所述硼氢化钠的质量比为100:1-5。

3.根据权利要求1-2中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，醛基化反应的温度为10-50℃，时间为0.5-5h，转速为50-500rpm。

4.根据权利要求1-2中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，偶联反应的温度为10-40℃，时间为2-30h，转速为50-500rpm。

5.根据权利要求1-2中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，还原反应的温度为2-6℃，时间为0.5-5h。

6.根据权利要求1-2中任意一项权利要求所述的一种用于分离纯化α-葡萄糖苷酶的亲和层析介质的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中，所述亲和层析介质储存的温度为2-6℃，所述乙醇溶液的浓度为70-75％。

7.一种分离纯化α-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，利用权利要求1-6中任意一项权利要求制备得到的亲和层析介质分离纯化所述α-葡萄糖苷酶，包括以下步骤：

(1)将亲和层析介质装入层析柱中，用蒸馏水平衡；

(2)将新鲜动物小肠排空内容物，用2-6℃的冰冷蒸馏水冲洗干净，冰浴下切开小肠，用薄竹片刮取小肠黏膜，加入1-3倍体积、温度为2-6℃的冰冷蒸馏水，匀浆，在温度为4℃、转速为8000rpm条件下，低温离心20min，取上清液，得到α-葡萄糖苷酶粗酶液；

(3)将步骤(2)中得到的α-葡萄糖苷酶粗酶液加入层析柱中孵育10min后，使用浓度为1％的氯化钠溶液洗脱杂蛋白，设定流速为1-1.5倍柱体积/h，洗脱2h，再使用浓度为1％麦芽糖溶液洗脱α-葡萄糖苷酶，流速为1-1.5倍柱体积/h，洗脱1h；

(4)将步骤(3)中得到的α-葡萄糖苷酶洗脱液装入截留分子量1500的透析袋，放入2-6℃的100倍体积的冰冷蒸馏水透析，每隔8小时换一次冰冷蒸馏水，共换3次；

(5)将步骤(4)中得到的α-葡萄糖苷酶溶液冷冻干燥，得到α-葡萄糖苷酶冻干粉，称重后装瓶密封，-20℃冷冻保存。