[发明专利]槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定方法

说明书

本发明提供槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定方法，涉及生物防治技术领域。该槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定方法，包括试验材料准备，真菌的分离纯化，离体块茎回接筛选试验，菌株的形态观察,菌种分子鉴定,菌株的生长特性筛选，菌种植株田间活体防效试验。通过从福鼎槟榔芋根际土壤和健康植株球茎内分离出经纯化后获得的22株真菌进行鉴定，经离体回接和田间活体防效试验鉴定槟榔芋菌株的生防效果，利用分子测序方法筛选出独立不重复的菌株，进行常规形态特征、生理生化试验测定，探究最佳的筛选方法，可为今后槟榔芋软腐病的生物防治提供一些研究参考，制得大力推广。

技术领域

本发明涉及生物防治技术领域，具体为槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定方法。

背景技术

槟榔芋是天南星科芋属植物，它的株高1.3m左右，每株有母芋和小芋，生长旺盛，块茎呈圆柱或椭圆形，剖开芋肉呈现槟榔花纹，乳白色中略带紫红色花纹，经烹饪后香味浓郁且口感松软，故又称之为香芋，槟榔芋营养价值高，富含蛋白质、淀粉、矿物质和多种维生素等物质，具有益脾胃和补气养肾等功效，因是日常烹饪美食的上乘原料，又兼有滋补作用而市场需求广阔。

软腐病是槟榔芋病害中最为主要的一种，近年来在农业生产上造成的危害日益严重，株发病率一般为3％～15％，严重时超过50％甚至绝收，槟榔芋软腐病发病多体现在槟榔芋的叶柄基部或地下球茎，叶柄基部染病初期有不明显病斑，颜色变化为暗绿色，有水渍出现，后期为叶柄内的腐烂和颜色加深变褐，叶片卷曲发黄；地下球茎染病导致球茎内部逐渐软化腐烂并散发难闻臭味，发病迅速最终导致整株枯萎倒伏，病菌侵入将在寄主植株内部迅速繁殖，对槟榔芋的生长具毁灭性的伤害。软腐病病原菌为细菌，病残组织携带病菌于土壤或球茎中越冬，通过伤口、气孔侵入，经昆虫和灌溉流水的蔓延，造成再次侵染，温度在25～30℃时最容易发病，暴风雨、高温高湿等易传播流行，连作地、田间湿度大、害虫病发等类型的土地极易发病，造成严重的经济损失。

目前在生产上对槟榔芋软腐病的预防方法主要是农业防治和化学药剂防治，农业防治通过选株、种子消毒、栽培管理等方面，化学防治主要为化学杀菌剂喷灌淋，这些防治措施效果并不理想，至今未能找到特效药防治槟榔芋软腐病，而且长期使用化学药剂容易让病菌产生抗药性，生产上为了达到同等的防治效果就需要更为频繁和高浓度地使用化学药剂，但同时也易造成农产品农药残毒量的增加，影响食品安全和生态环境，而利用植物病害的生防菌可有效控制病害，因此筛选出高效的植物病害生防菌应用于农业生产在研究槟榔芋病害的防治上具有积极可观的实践意义。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定方法，解决了防治槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：槟榔芋软腐病病害的生防真菌鉴定方法，包括以下步骤：

S1.试验材料准备

材料：土样和健康槟榔芋球茎均采自福建省福鼎市贯岭镇河坑村槟榔芋种植田地，选取不同种植地块，其中土样取深度10～15cm的健康槟榔芋植株根际土壤3处各200g，健康槟榔芋球茎5棵，标记后放入装有冰袋的保温箱中带回备用。槟榔芋软腐病病原细菌来源于实验室前期分离鉴定菌株。

S2.真菌的分离纯化

土壤分离真菌：称取10g土壤放入盛有90mL无菌水并有玻璃珠三角瓶中，振荡10min，依次稀释成10^-1-10^-8的稀释液。分别吸取上述稀释液100μL均匀涂于PDA培养基平板上，设三次重复，于28℃恒温箱倒置培养3～5d，每天观察生长情况。