[发明专利]大肠杆菌及6种致病型基因的快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.大肠杆菌及6种致病型基因的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)、13套引物设计：分别下载GenBank中发表的大肠杆菌基因aggR、ast A、bfpB、escV、ipa H、Ita、Itb、pic、stp、sth、stx1A、stx2A和uidA，运用引物在线设计软件PrimerExplorerV4分别设计13套LAMP检测引物；

步骤2)、提取细菌的DNA模板；

步骤3)、将引物、DNA模板与检测试剂制成LAMP反应体系，利用LAMP反应体系对目标序列进行LAMP扩增，进行检测，通过颜色变化判定目标序列的类型。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌及6种致病型基因的快速检测方法，其特征在于，所述13套LAMP检测引物，分别为aggR、ast A、bfpB、escV、ipa H、Ita、Itb、pic、stp、sth、stx1A、stx2A和uidA特征基因检测引物，每套均包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，成环引物LoopF和LoopB，其中，所述aggR的外引物F31和B31的碱基序列分别如SEQ ID No.1、SEQID No.2所示，所述aggR的内引物FIP1和BIP1的碱基序列分别如SEQ ID No.3、SEQ ID No.4所示，所述aggR的成环引物LoopF1和LoopB1的碱基序列分别如SEQ ID No.5、SEQ ID No.6所示；所述ast A的外引物F32和B32的碱基序列分别如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8所示，所述ast A的内引物FIP2和BIP2的碱基序列分别如SEQ ID No.9、SEQ ID No.10所示，所述astA的成环引物LoopF2和LoopB2的碱基序列分别如SEQ ID No.11、SEQ ID No.12所示；所述bfpB的外引物F33和B33的碱基序列分别如SEQ ID No.13、SEQ ID No.14所示，所述bfpB的内引物FIP3和BIP3的碱基序列分别如SEQ ID No.15、SEQ ID No.16所示，所述bfpB的成环引物LoopF3和LoopB3的碱基序列分别如SEQ ID No.17、SEQ ID No.18所示；所述escV的外引物F34和B34的碱基序列分别如SEQ ID No.19、SEQ ID No.20所示，所述escV的内引物FIP4和BIP4的碱基序列分别如SEQ ID No.21、SEQ ID No.22所示，所述escV的成环引物LoopF4和LoopB4的碱基序列分别如SEQ ID No.23、SEQ ID No.24所示；所述ipa H的外引物F35和B35的碱基序列分别如SEQ ID No.25、SEQ ID No.26所示，所述ipa H的内引物FIP5和BIP5的碱基序列分别如SEQ ID No.27、SEQ ID No.28所示，所述ipa H的成环引物LoopF5和LoopB5的碱基序列分别如SEQ ID No.29、SEQ ID No.30所示；所述Ita的外引物F36和B36的碱基序列分别如SEQ ID No.31、SEQ ID No.32所示，所述Ita的内引物FIP6和BIP6的碱基序列分别如SEQ ID No.33、SEQ ID No.34所示，所述Ita的成环引物LoopF6和LoopB6的碱基序列分别如SEQ ID No.35、SEQ ID No.36所示；所述Itb的外引物F37和B37的碱基序列分别如SEQ ID No.37、SEQ ID No.38所示，所述Itb的内引物FIP7和BIP7的碱基序列分别如SEQ IDNo.39、SEQ ID No.40所示，所述Itb的成环引物LoopF7和LoopB7的碱基序列分别如SEQ IDNo.41、SEQ ID No.42所示；所述pic的外引物F38和B38的碱基序列分别如SEQ ID No.43、SEQ ID No.44所示，所述pic的内引物FIP8和BIP8的碱基序列分别如SEQ ID No.45、SEQ IDNo.46所示，所述pic的成环引物Loop8和LoopB8的碱基序列分别如SEQ ID No.47、SEQ IDNo.48所示；所述stp的外引物F39和B39的碱基序列分别如SEQ ID No.49、SEQ ID No.50所示，所述stp的内引物FIP9和BIP9的碱基序列分别如SEQ ID No.51、SEQ ID No.52所示，所述stp的成环引物LoopF9和LoopB9的碱基序列分别如SEQ ID No.53、SEQ ID No.54所示；所述sth的外引物F310和B310的碱基序列分别如SEQ ID No.55、SEQ ID No.56所示，所述sth的内引物FIP10和BIP10的碱基序列分别如SEQ ID No.57、SEQ ID No.58所示，所述sth的成环引物LoopF10和LoopB10的碱基序列分别如SEQ ID No.59、SEQ ID No.60所示；所述stx1A的外引物F311和B311的碱基序列分别如SEQ ID No.61、SEQ ID No.62所示，所述stx1A的内引物FIP11和BIP11的碱基序列分别如SEQ ID No.63、SEQ ID No.64所示，所述stx1A的成环引物LoopF11和LoopB11的碱基序列分别如SEQ ID No.65、SEQ ID No.66所示；所述stx2A的外引物F312和B312的碱基序列分别如SEQ ID No.67、SEQ ID No.68所示，所述stx2A的内引物FIP12和BIP12的碱基序列分别如SEQ ID No.69、SEQ ID No.70所示，所述stx2A的成环引物LoopF12和LoopB12的碱基序列分别如SEQ ID No.71、SEQ ID No.72所示；所述uidA的外引物F313和B313的碱基序列分别如SEQ ID No.73、SEQ ID No.74所示，所述uidA的内引物FI13和BIP13的碱基序列分别如SEQ ID No.75、SEQ ID No.76所示，所述uidA的成环引物LoopF13和LoopB13的碱基序列分别如SEQ ID No.77、SEQ ID No.78所示。