[发明专利]一种无酶聚合物免疫探针及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种无酶聚合物免疫探针及其制备方法和应用，属于生物传感技术领域；本发明中首先将金纳米粒子、壳聚糖和Fc纳米球悬浊液混合制备了金纳米粒子功能化的二茂铁二甲酸Fc@AuNPs，并将其与金黄色葡萄球菌抗体反应生成免疫探针，最后将免疫探针组装成传感器，用于检测金黄色葡萄球菌；所述传感器能够快速、高效、灵敏的检测牛奶中金黄色葡萄球菌；所述金黄色葡萄球菌的检测范围为1.62×10supgt;2/supgt;~1.62×10supgt;8/supgt; CFU/mL，检测限为63 CFU mLsupgt;‑1/supgt;。

技术领域

本发明属于生物传感技术领域，提供了一种无酶聚合物免疫探针及其制备方法和应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是一种较为常见的致病菌。其以视频为繁殖载体，在代谢活动中产生肠毒素，进而通过食物链进入人体引起食物中毒；并且金黄色葡萄球菌会导致奶牛患乳腺炎，造成奶业严重经济损失。因此研究出快速、高效的检测方法具有实际研究意义。

金黄色葡萄球菌的检测方法主要有酶学显色检测法、免疫检测法、分子检测法等。基于特异性分泌酶进行显色培养的酶学显色检测法易出现检测结果的假阳性。基于全细胞或菌体特征性物质“抗体－抗原”结合识别原理的免疫检测法虽然特异性强，但是对所用生物制剂要求很高。基于基因扩增分析的分子检测法所需的检测费用太高。因此，亟需研究出一种能够满足现阶段食品安全需求的金黄色葡萄球菌检测方法

发明内容

本发明的目的在于提供一种无酶聚合物免疫探针及其制备方法和应用。本发明中，首先将金纳米粒子、壳聚糖和Fc纳米球悬浊液混合制备了金纳米粒子功能化的二茂铁二甲酸Fc@AuNPs，并将其与金黄色葡萄球菌抗体反应生成免疫探针，最后将免疫探针组装成传感器，用于检测金黄色葡萄球菌。所述传感器能够快速、高效、灵敏的检测牛奶中金黄色葡萄球菌。

为了解决上述问题，本发明首先提供了一种无酶聚合物免疫探针，所述免疫探针基于金纳米粒子功能化的二茂铁二甲酸(Fc@AuNPs)与金黄色葡萄球菌抗体组装而成。

本发明还提供了所述无酶聚合物免疫探针的制备方法，具体制备步骤如下所示：

(1)金纳米粒子(AuNPs)溶液的制备：

先取用适量HAuCl₄溶液，加热并不断搅拌至沸腾，再向其中加入柠檬酸三钠溶液，继续加热至溶液颜色变深，然后停止加热，冷却到室温，最后放置冰箱保存，备用；

其中步骤(1)中HAuCl₄溶液的摩尔浓度为0.3mM，柠檬酸三钠溶液中柠檬酸三钠的质量分数为1％，HAuCl₄溶液与柠檬酸三钠的体积比为40:1。

(2)壳聚糖(CS)溶液的制备：

取一定量的壳聚糖与醋酸溶液混合，超声搅拌至溶解，制得壳聚糖溶液，储存于冰箱中备用；

其中，所述醋酸溶液为醋酸与二次蒸馏水配制，溶液中醋酸的质量分数为1％；制得的壳聚糖溶液中壳聚糖的质量分数为1％。

(3)Fc纳米球悬浊液的制备：

将二茂铁二甲酸溶于适量甲醇，在自然光下照射2h并不断搅拌至混合溶液呈灰褐色，然后离心得到Fc纳米球沉淀，蒸馏水洗涤、过滤，然后将Fc纳米球固体分散于一定量超纯水中得到Fc纳米球悬浊液，储存于冰箱中备用；

所述二茂铁二甲酸在甲醇中的浓度为2mg mL^-1，所述超纯水的用量为2～5mL。

(4)金纳米粒子功能化的二茂铁二甲酸(Fc@AuNPs)的制备