[发明专利]一种无酶聚合物免疫探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种无酶聚合免疫探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）Fc@AuNPs的制备：

将Fc纳米球悬浊液与AuNPs溶液、壳聚糖溶液混合反应，反应过程中不断搅拌，反应结束后离心取沉淀、将沉淀用蒸馏水洗涤、过滤后，得到金纳米粒子功能化的二茂铁二甲酸Fc@AuNPs固体，将其分散于一定量的超纯水中，得到Fc@AuNPs悬浊液，储存于冰箱中备用；所述Fc纳米球悬浊液、AuNPs溶液、壳聚糖溶液的体积比5 ：1~1.5：1~2，所述超纯水的用量为5 mL；所述反应时间为1h；

（2）无酶聚合物免疫探针的制备：

将步骤（1）中制备的Fc@AuNPs悬浊液与金黄色葡萄球菌抗体混匀，在37 ℃下反应40min，反应过程中不断搅拌， 反应结束后离心取沉淀，然后蒸馏水洗涤、过滤，最后将其分散于一定量的PBS溶液中，得到无酶聚合物免疫探针；所述金黄色葡萄球菌抗体浓度为80 μg/mL，Fc@AuNPs悬浊液与金黄色葡萄球菌抗体的体积分别为5 mL、1 mL，所述PBS溶液pH值为7.4，其添加量为2 mL。

2.一种权利要求1所述方法制备的无酶聚合物免疫探针，其特征在于，所述免疫探针基于金纳米粒子功能化的二茂铁二甲酸Fc@AuNPs与金黄色葡萄球菌抗体组装而成。

3.一种基于权利要求2所述无酶聚合物免疫探针制备的免疫传感器，其特征在于，所述传感器包括工作电极、辅助电极和参比电极；所述工作电极中含有无酶聚合物免疫探针；所述辅助电极为铂丝电极；所述参比电极为饱和甘汞电极。

4.根据权利要求3所述的免疫传感器，其特征在于，采用如下方法制备：将预处理后的电极浸入到HAuCl₄和H₂SO₄溶液中电沉积，接着用PBS冲洗电极表面，然后分别向电极表面滴加金黄色葡萄球菌抗体溶液、含1%牛血清蛋白的PBS溶液、金黄色葡萄球菌溶液和免疫探针，滴加后均进行一段时间的反应，反应后用PBS清洗，得到基于免疫探针制备的工作电极；

将制备的工作电极、辅助电极铂丝电极和参比电极饱和甘汞电极作组装，得到免疫传感器。

5. 根据权利要求4所述的免疫传感器，其特征在于，步骤（2）中，所述HAuCl₄的浓度为1mmol L^-1 ；所述H₂SO₄溶液的浓度为0.5 mol/L；所述金黄色葡萄球菌抗体溶液的浓度为80µg mL^-1；所述金黄色葡萄球菌溶液的浓度为1.62×10⁵ CFU mL^-1；所述金黄色葡萄球菌抗体溶液、含1%牛血清蛋白的PBS溶液、金黄色葡萄球菌溶液和免疫探针的体积均为15μL。

6.权利要求3所述的免疫传感器在检测金黄色葡萄球菌中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用为检测牛奶中的金黄色葡萄球菌。

8. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：免疫传感器标准曲线的建立和实际牛奶样品的检测；所述标准曲线为：当金黄色葡萄球菌浓度为1.62×10²~1.62×10⁸ CFU mL^-1时，检测的线性回归方程为：I=0.7686lgC+1.5123，线性相关系数R²为0.994,最低检测限为63 CFU mL^-1。