[发明专利]一种用于培养冬虫夏草菌的液体培养基及其制法

说明书

本发明涉及一种用于培养冬虫夏草菌的液体培养基。该培养基含有碳源、氮源，以及复合维生素B和菜籽油中的一种或两种。本发明还涉及所述液体培养基的制备方法和使用所述培养基培养冬虫夏草菌的方法。本发明的培养基用于培养冬虫夏草菌液生分生孢子具有培养周期短、产生分生孢子浓度高、更不易污染其它微生物等显著优点。

技术领域

本发明属于微生物培养领域，涉及一种用于培养冬虫夏草菌的液体培养基，具体地涉及一种促进冬虫夏草菌产生液体分生孢子的液体培养基及其制备方法。

背景技术

冬虫夏草菌[Ophiocordyceps sinensis(Berk.)G.H.Sung,J.M.Sung,Hywel-JonesSpatafora(≡Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)]是青藏高原特有的名贵药用菌，科学研究证明其具有免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂等广泛的药理作用。由于其独特的药用价值以及良好的应用前景，加上分布地域的局限，野生资源相对有限，其人工培植成为近几十年的研究热点和难点。

作为一种虫生真菌，冬虫夏草菌隶属子囊菌门，其生活史包括有性型和无性型两个阶段。形态学研究和分子鉴定均证实中国被毛孢(Hirsutella sinensis)是冬虫夏草的无性型。其有性阶段主要是由冬虫夏草菌专性寄生钩蝠蛾属(Thitarodes，属鳞翅目)为主的数十种昆虫的幼虫阶段完成的，其中幼虫虫体相当于真菌生长的培养基。

在真菌的液体发酵过程中，根据培养条件的不同，产生的繁殖体形式可能有两种：芽生孢子(blastospore)和液生分生孢子(submerged conidia)。其中液生分生孢子的形状、大小与气生分生孢子相近，往往是通过芽生孢子通过微循环产孢的方式产生，也可能直接由菌丝产生，其着生的分生孢子梗往往比固体培养基上的气生分生孢子梗小。分生孢子的培养与大量制备是冬虫夏草人工培植过程中的一个重要环节。目前，冬虫夏草分生孢子研究存在的主要困难是分生孢子产生周期长、分生孢子产量低、培养过程中容易受到其它微生物的污染等。和其它常见真菌相比，冬虫夏草菌的产孢量非常低。如何通过培养基的改良和培养条件的优化获得较大浓度的分生孢子，是冬虫夏草顺利实现产业化亟待解决的问题之一。

在现有技术中，冬虫夏草菌液体培养基的常规成分为碳源、氮源和无机盐，目前对冬虫夏草菌液体培养基的研究也主要集中在提高冬虫夏草菌的菌丝产量上(刘欣,张宗豪,李玉玲,等.冬虫夏草菌液体发酵培养基的优化研究[J].中国草地学报,2010,32(s1):14-16.)。已有报道的冬虫夏草分生孢子基本上都是固体培养的分生孢子，产量低而且培养周期长，培养得到的分生孢子产量一般小于1×10⁵个/mL(李玉玲.不同因子对冬虫夏草真菌产生分子孢子的研究[J].食用菌,2002,24(5):8-8.)。所以，目前急需一种能获得较大浓度的分生孢子的冬虫夏草菌液体培养基。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的限制，提供一种促进冬虫夏草菌产生液生分生孢子的液体培养基。

本发明的第一个目的是提供一种用于培养冬虫夏草菌的液体培养基，含有碳源、氮源，以及复合维生素B和菜籽油中的一种或两种。优选地，所述碳源选自马铃薯、玉米碴和蔗糖中的一种或多种，所述氮源选自蛋白胨和酵母浸出物中的一种或两种。更优选地，所述培养基的碳源和氮源的重量比为100:1～20，优选地，以重量份数计，所述培养基含有马铃薯100～200份，玉米碴20～50份，蛋白胨2.5～10份，酵母浸出物1～10份，和蔗糖10～20份，以及0.1份～1.5份复合维生素B和1～5份菜籽油中的一种或两种。

优选地，每升所述培养基含有马铃薯100～200g，玉米碴20～50g，蛋白胨2.5～10g，酵母浸出物1～10g，和蔗糖10～20g，以及0.1g～1.5g复合维生素B和1～5g菜籽油中的一种或两种。进一步优选地，每升所述培养基含有马铃薯150g，玉米碴30g，蛋白胨5g，酵母浸出物2g，和蔗糖20g，以及0.25g～0.5g复合维生素B和1.5g～3g菜籽油中的一种或两种。所述液体培养基还包含余量的水。