[发明专利]大豆粕抗菌肽及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种大豆粕抗菌肽及其制备方法和用途，该方法包括以下步骤：取大豆粕加水混匀，加入还原糖和曲精，振荡发酵，灭酶，离心分离，得到的上清液为大豆粕发酵液；以每10‑20％为一个浓度梯度加入无水乙醇，离心，取上清液，继续加入无水乙醇，使得上清液中乙醇浓度达到40‑80％，离心取上清液，冷冻干燥，得到大豆粕抗菌肽。本发明采用等浓度梯度依次醇沉法，通过最终浓度不同的乙醇处理去除弱抗菌特性组分、富集强抗菌特性组分，一方面可以高效分离目标肽，富集分子量在1000‑5000Da之间的肽，同时达到高效浓缩目标肽的目的，简化了工艺流程。

技术领域

本发明属于大豆粕深加工领域，具体涉及一种大豆粕抗菌肽及其制备方法和用途。

背景技术

抗生素是指对细菌、病毒或者寄生虫等具有一定抑制或者杀灭作用的药物，是由细菌和真菌等微生物或其他高等动物在繁殖过程中产生的具有抗病原体作用的次级代谢产物。自被发现以来，由于能有效治愈各种感染病例，受到广泛应用，在医用治疗领域做出了重大贡献。抗生素除用作人类医用治疗外，在医治动物感染疾病，提高动物免疫力，增进产量，提高经济价值等方面也具有重要贡献。

随着抗生素使用量的日益增长及人类对抗生素的认识不足，出现了抗生素滥用的问题，致使某些致病细菌产生耐药性，使得抗生素失去了其原本杀菌治病功能。此外，由于抗生素的消化吸收率极低，摄入后大部分未被吸收的抗生素会附着在人或动物的尿液或者粪便中排出体外，不仅对环境造成极大的污染，甚至通过大自然循环，最终回到人体内积累，从而危害人类及其它生物的身体健康。

抗菌肽是指某些生物体内自身所带有的或者可以通过自身合成的具有抗菌活性的小分子肽类物质，是生物体内非特异性免疫抵御系统的组成成分，可抵御部分外来病原体的入侵。抗菌肽能够替代抗生素的医用作用，且十分有效，其可通过生物体自身合成，用于抵御外来病原菌，属于自身防御系统内部组分的一种小分子蛋白。抗菌肽来源广泛，目前已从动植物和细菌中发现多种具有抵抗病原菌(细菌、真菌等)功能特性的抗菌肽。

大豆是我国重要农作物之一，其中含有丰富的蛋白质及必需氨基酸。大豆粕是生产大豆油的副产品，研究表明大豆粕经过发酵后可用于制备提取大豆生物活性肽，能够显著增加大豆粕的附加值，可应用于食品和保健等行业，拥有很好的发展前景。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种利用大豆粕制备抗菌活性多肽的方法。该方法主要是利用微生物液态发酵大豆粕，促其释放抗菌活性肽，再通过乙醇分级分离，调控大豆粕发酵产物中抗菌多肽的分布情况，富集抗菌特性较强的蛋白多肽，此方法简单高效，安全，适合工业化大规模生产。

本发明的另一目的在于提供由上述方法制备得到的抗菌多肽。

本发明的再一目的在于提供上述的抗菌多肽的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种大豆粕抗菌肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)大豆粕发酵液的制备：取大豆粕，加水混匀，调整pH值为4.5-5.5，加入还原糖，再接种曲精，在32-37℃下保温振荡发酵36-48h；发酵完成后，灭酶，离心分离，得到的上清液为具有抗菌活性的大豆粕发酵液；以大豆粕质量为计算基准，还原糖加入量占1.5-2.5％，曲精的接种量占0.3-0.7‰。

(2)乙醇分离富集大豆粕抗菌肽：将大豆粕发酵液做适当浓缩，以每10-20％ (按质量计)为一个浓度梯度加入无水乙醇，每加入一个浓度梯度乙醇后恒温匀速搅拌1-2h，离心，取上清液，再往上清液中继续加入一个浓度梯度无水乙醇，使得上清液中乙醇浓度达到40-80％(按质量计)，恒温匀速搅拌1-2h后，离心取上清液，去除上清液中残余乙醇，冷冻干燥，得到大豆粕抗菌肽；

步骤(1)所选用的大豆粕为高温或低温大豆粕；

步骤(1)所述的还原糖为葡萄糖、果糖或麦芽糖中的一种以上，优选葡萄糖；