[发明专利]非洲猪瘟病毒N蛋白IgY抗体检测胶体金试纸及方法

说明书

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒N蛋白IgY抗体检测胶体金试纸及方法，属于非洲猪瘟病毒抗体的检测领域，其中所述试纸的结合垫为包被有兔抗鸡IgG‑胶体金复合物的胶体金垫，所述试纸的硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和ASFV重组抗原包被的检测线。该试纸条与现有技术相比，可迅速检测ASFV IgY抗体水平，本发明为了提高检测的灵敏度和线性范围，特制备了2种纯化的ASFV重组抗原，相比较其它常规ELISA抗体检测或胶体金检测方法，本发明更加的方便快捷，灵敏度更高。

技术领域

本发明涉及非洲猪瘟病毒N蛋白IgY抗体的快速检测技术领域，尤其涉及一种非洲猪瘟病毒N蛋白IgY抗体检测胶体金试纸及方法。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是一种具有高度传染性的猪病毒病。在家猪中可导致接近100％的高死亡率。ASF是由非洲猪瘟病毒(ASF Virus，ASFV)引起，ASFV是一种较大的双链DNA病毒，主要在巨噬细胞的细胞质中复制，ASFV是Asfarviridae科Asfivirus属唯一的成员。ASFV的天然宿主包括野猪和Ornithodoros属的节肢动物媒介。ASFV在其储存宿主的感染通常是无症状的，并且发展为持续感染。相反，ASFV对家猪的感染可导致致命的出血热。

非洲猪瘟病毒最大的特性就是“两高”：高传染和高死亡。猪场一旦被感染非洲猪瘟病毒，很快就会向四周蔓延，染病的生猪死亡率达100％，无一幸免。非洲猪瘟一般是通过检测手段才能发现，肉眼辩识并不一定准确。在感染了该病毒的猪体内，其五脏、血液和粪便都有病毒的生存。

现阶段对于这种病毒的灭杀还具有很大的难度，至今还没有特效药能够有效的消灭它，其相应的接种疫苗也没有成熟，还不能临床应用。

胶体金免疫层析技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。它是继传统三大免疫标记技术之后又一较为成熟的、得到广泛应用的免疫标记技术。当待测样品加入到样品膜上后，由于微孔滤膜的毛细管作用，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，检测一般只要5～10min就会出结果，相比其它方法(如ELISA需1～2h，荧光定量PCR法需要2小时)大大的缩短了检测时间。其测试结果以肉眼可见的显色条带来判断，不需要特别仪器设备，只需要试纸条或渗滤试剂盒，样品只要做非常简单的处理或不需要做前处理。且具有成本较低、操作简单、试剂稳定不受温度等外界因素影响、方便快捷、特异敏感、稳定性强、结果判断直观等优点，因而特别适合于现场快速检查，具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景，代表了诊断试剂简单快速、便于普及的发展方向。

中国专利文献CN201920618571.X公开了一种非洲猪瘟抗体胶体金检测卡，所述检测卡包括检测试纸，检测试纸包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、全血膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合垫上包被有胶体金标记的非洲猪瘟重组抗原，硝酸纤维素膜上依次设有检测线、半对照线、对照线和质控线，所述检测线、半对照线和对照线上包被非洲猪瘟病毒重组抗原，所述质控线上包被兔抗金黄色葡萄球菌A多克隆抗体。

中国专利文献CN201310197035.4公开了一种非洲猪瘟病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸条制备方法，并具体公开了用胶体金颗粒标记纯化p54重组抗原，以金黄色葡萄球菌A蛋白作为检测线，以p54免疫血清作为质控线，制备胶体金免疫层析试纸条。

以上发明仅能定性检测猪体内是否有该抗体，而不能定量检测出该抗体的含量是否已经达到抵抗病毒的滴度，无法判断猪体内的抗体是否足以抵抗非洲猪瘟病毒。本发明制备2种纯化的ASFV重组抗原ASFV-1和ASFV-2，混合使用后，不仅能定性检测非洲猪瘟病毒，而且能够提高检测的灵敏度和检测范围，抗体浓度在50ng/ml-800ng/ml还有很高的检测线，明显提高了检测线性范围。

发明内容