[发明专利]猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光试纸及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光试纸及其制备方法和应用，属于猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体快速检测技术领域，所述试纸条的结合垫含有荧光微球标记的兔抗鸡IgY，硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和猪蓝耳病毒GP5重组抗原包被的检测线。本发明的试纸可用于现场快速检测或者实验室检测，只需要5‑10min，操作方便，操作人员不需要专业培训，且不需要专门的实验室，克服了现有检测方法的局限性，具有良好的市场前景，相比较ELISA抗体检测方法，本发明更加的方便快捷，灵敏度高，利于推广。

技术领域

本发明涉及猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体(猪蓝耳病毒GP5卵黄抗体)的快速检测技术领域，尤其涉及一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光纸质及其制备方法和应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveand respiratorysyndrome，PRRS)又称猪蓝耳病，是20世纪80年代末暴发的一种新型的高致病性猪传染病.由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种以感染猪发热、厌食，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。自2006年开始，高致病性猪蓝耳病在我国的爆发与流行给养猪业带来了巨大的经济损失。PRRS 病毒(PRRSV)具有高度变异性，有美洲型和欧洲型两种毒株，我国流行的均属于美洲型。

PRRSV有9个不分节段的开放阅读框编码。多种非结构蛋白和8个结构蛋白，其中GP5和M蛋白是病毒的主要结构蛋白。GP5蛋白又称为E蛋白，由ORF5编码。是一种跨膜糖蛋白，位于病毒粒子的包膜上，为糖基化的囊膜蛋白。GP5蛋白具有较好的免疫原性，可诱导产生中和抗体，能在体外中和病毒的感染性。动物机体在中和抗体出现之后，抗血清主要识别GP5蛋白。目前，针对猪蓝耳病毒GP5的疫苗较少，且无论进口或国产疫苗效果均不佳，而猪蓝耳病毒GP5卵黄抗体作为饲料添加剂在使用中发现对猪蓝耳病毒GP5有较好的治疗作用和预防作用。

现有技术中针对猪蓝耳病毒抗体检测的试剂包括胶体金检测试纸，如中国专利文献 CN200810112726.9公开了一种猪蓝耳病毒抗体胶体金检测试纸条、其制备方法及其应用，所述试纸条包括同时包被猪蓝耳病毒N蛋白(检测线)和抗猪蓝耳病毒N蛋白的多克隆抗体(质控线)的硝酸纤维膜，以及含有胶体金标记猪蓝耳病毒N蛋白的玻璃纤维膜(胶体金垫)。又如中国专利文献CN201911300052.X公开的一种猪蓝耳病毒嵌合抗原以及检测猪蓝耳病毒抗体的胶体金免疫层析试纸条，其中，所述试纸条是以猪蓝而病毒嵌合抗原包被检测线，以兔抗猪IgG抗体包被质控线，以胶体金颗粒标记的金黄色葡萄球菌蛋白A的复合物包被结合垫。目前市场上暂无针对猪蓝耳病毒GP5卵黄抗体检测的试剂。

免疫荧光免疫层析(Colloidal gold-based immunochromato graphic assay,GICA) 技术是一种将免疫荧光标记技术、免疫检测技术和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的固相标记免疫检测技术，具有简便、省时、样本用量少、结果易判读等特点，常在资源匮乏或非实验室环境中进行目标物的定性、半定量和定量检测。应用范围包括生物医学中的病原体、药物、激素和代谢物检测，植物检疫，兽医，饲料/食品和环境指标的测试。相比较ELISA等其他检测手段，具有快速/方便/经济的特点。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光试纸及其制备方法和应用，以提供一种针对猪蓝耳病毒GP5卵黄抗体的快速检测的方法，解决目前没有专门针对猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测试剂的技术空白，达到快速检测出饲料中是否真正含有GP5卵黄抗体的目的，保证饲养业主的利益。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：