[发明专利]一种检测X连锁鱼鳞病的QF-PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测X连锁鱼鳞病的QF‑PCR检测试剂盒，使用步骤如下：1)、进行QF‑PCR检测：待检测物使用ABI 3500DX基因分析仪进行毛细管电泳并采集荧光信号；电泳结果利用GeneMapper软件分析，得到每个STR位点的等位基因的峰位置与峰面积；对峰型结果的解读依赖于各位点等位基因峰面积的比值；2)、SNP‑Array检测。本发明的检测试剂Devyser Compact v3中的ZFX探针与XLI疾病的关键治病区域Xp22.31区域及其关键治病基因STS基因可能高度连锁，该试剂盒在检测13、18、21号染色体及性染色体非整倍体异常的基础上，还可以同时检测男性XLI疾病。

技术领域

本发明属于医学分子生物学领域，更具体地说，涉及一种检测X连锁鱼鳞病的QF-PCR检测试剂盒。

背景技术

先天遗传性鱼鳞病是一组异质性疾病，标志性表现为皮肤脱屑，其它临床表现包括剥脱性皮炎(红皮病)、掌跖角化、多汗及反复感染等。非综合征型鱼鳞病分为寻常型鱼鳞病、X连锁鱼鳞病(X-linked ichthyosis，XLI)、常染色体隐性遗传性鱼鳞病、角蛋白性鱼鳞病等。

XLI也称类固醇硫酸酯酶(Steroid Sulfatase，STS)缺乏症，男性中发病率约1/6000-1/2000。本病主要在出生时或婴儿早期发病，四肢、面、颈、躯干、臀部常可见大面积的鳞屑，以颈、面、躯干受累最严重，几乎全部见于男性患者[3-4]。鳞屑通常大而显著，褐色或黑色，无毛囊角化，掌趾皮肤正常，少部分患者并发皮肤外的症状，如角膜浑浊、支气管哮喘等过敏反应。

XLI是由于STS基因缺陷而导致的X连锁隐性遗传性非综合征性鱼鳞病。STS基因编码的蛋白为类固醇硫酸酯酶，具有硫酸酯水解酶活性，可水解硫酸胆固醇和硫酸类固醇。若STS活性丧失，会造成硫酸胆固醇积聚，角质层细胞结合紧密不能正常脱落，形成鳞屑。STS基因位于Xp22.3，全长146kb，含10个外显子。由于STS基因位于X染色体上避开了X染色体失活(莱昂化作用)的小片段内，因此几乎全部的XLI见于男性患者。XLI女性携带者仅STS活性降低，除了冬季皮肤较干燥，无其他可识别的临床特征。STS基因的缺失或突变均可导致STS活性完全丧失，其中大约80％～90％是由STS基因大片段缺失多导致，其余少部分则由点突变所致。目前的检测方法包括FISH、MLPA、array CGH、SNP array和测序等，但大多成本较高且通量较低，无法大规模进行X连锁鱼鳞病的检测。

鉴于上述情况，现设计一种检测X连锁鱼鳞病的QF-PCR检测试剂盒，ZFYX探针组可作为缺失型X连锁鱼鳞病发生的特异性检测标志物，对缺失型X连锁鱼鳞病的早期诊断提供了检测。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供了一种检测X连锁鱼鳞病的QF-PCR检测试剂盒，以克服现有技术中存在的不足。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种检测X连锁鱼鳞病的QF-PCR检测试剂盒，其特征在于：使用步骤如下：

1)、进行QF-PCR检测：

待检测物使用ABI 3500DX基因分析仪进行毛细管电泳并采集荧光信号；

电泳结果利用GeneMapper软件分析，得到每个STR位点的等位基因的峰位置与峰面积；

对峰型结果的解读依赖于各位点等位基因峰面积的比值，3320例待检测物中，10例男性胎儿ZFYX探针组仅检出1个信号，提示ZFX探针区域存在微缺失可能，还有3例男性胎儿ZFX与ZFY探针的检测信号比为2:1，提示ZFX探针区域存在微重复可能；

2)、SNP-Array检测：