[发明专利]一种糖蛋白N-糖组图谱模型的建立方法及应用

说明书

本发明提供了一种糖蛋白N‑糖组图谱模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)检测待测样品中N‑糖苷键相连的糖链以获得特定糖型及丰度信息的N‑糖指纹图谱；(2)针对N糖指纹图谱中特异性N糖结构与丰度的Peak1、Peak2及Peak8建立模型：FIB‑G＝0.100×P1+0.612×P2‑0.445×P8+0.015。本发明提供的糖蛋白N‑糖组图谱模型的建立方法及其构建的图谱模型操作简单，灵敏度高，重复性高，稳定性好，临床适宜性强。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种新型肝硬化和/或肝纤维化糖蛋白N-糖组图谱模型的建立方法及其应用。

背景技术

肝硬化(cirrhosis)是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。肝硬化临床诊断过程中需综合考虑包括临床表现、实验室检查、组织学、影像学及组织病理学诸多依据。肝硬化由肝纤维发展而来，晚期肝硬化作为终末期肝病，具有不可逆特性，严重影响肝功能并可导致肝功能衰竭而影响患者生存，因此早期发现才能实现早期干预，病理组织学检查仍是目前诊断肝纤维化和早期肝硬化的金标准，但鉴于组织学检查固有的缺陷如损伤性检查可能带来的损伤不宜动态检测重复进行、存在取材差异、不同病理医师判读差异等，寻求非损伤性肝纤维化、肝硬化早期诊断标志物成为这一领域科学家研究的目标。因此，近年来国内外虽然已经发展了多项非创诊断技术用于评估肝纤维化，包括测定肝脏硬度的影像学技术、血清学标志和各类评分系统等，这些标志物主要包括纤维化密切相关的细胞外基质成分例如：透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、III型前胶原肽和IV型胶原等，以及间接反映肝纤维化对机体相关机能损伤的指标例如血小板计数(PLT)、r-球蛋白、凝血酶原时间(PT)、谷丙转氨酶、胆红素和载脂蛋白A1等，但目前现有的非创血液诊断方法在临床应用中敏感性和特异性仍然不能满足临床需求。

肝纤维化是各种慢性肝脏疾病的共同终末途径，可进展为肝硬化，甚至进展为肝衰竭和肝癌，对于肝纤维化和代偿期肝硬化进行早期诊断非常重要。肝穿刺活检是诊断肝纤维化的金标准，但穿刺有创伤性且可能引起严重并发症，需要有经验的病理科医生对结果分析，且穿刺取标本时存在误差等缺点限制了其广泛的临床应用。目前肝纤维化诊断的金标准仍然为病理学诊断，但鉴于病理学检测固有的缺陷，目前无创检查已逐渐成为临床发展的方向。

发明内容

鉴于此，本申请提供一种糖蛋白N-糖组图谱模型的建立方法及图谱模型，该方法具有灵敏度高、操作简单、重复性高、稳定性好等优点，临床适宜性强，适用于临床检验科，可用于临床推广使用。

本发明提供了一种糖蛋白N-糖组图谱模型的建立方法，包括如下步骤：

(1)检测待测样品中N-糖苷键相连的糖链以获得特定糖型及丰度信息的N-糖指纹图谱；

(2)基于N-糖指纹图谱，选择Peak1、Peak2及Peak8，采用logistic回归模型构建了基于N-糖谱的多参数模型：FIB-G＝0.100×P1+0.612×P2-0.445×P8+0.015；

其中，P1是N-糖指纹图谱中Peak1的丰度，P2是N-糖指纹图谱中Peak2的丰度，P8是N-糖指纹图谱中Peak8的丰度。

在本申请的一个具体实施方式中，所述步骤(1)中使用DNA测序仪(ABI3500)进行N-糖链检测，采用GeneMapper 4.1软件分析特定糖型及其丰度信息，并通过SPSS(13.0)软件对数据进行统计学分析。

在本申请的一个具体实施方式中，所述待测样品为离体血清样品。优选地，所述待测样品为人血清样品。

在本发明的一个具体实施方式中，所述N-糖指纹图谱可通过荧光毛细管电泳、液相色谱或液质联用等检测方法所获得的。