[发明专利]人吡咯林-5-羧酸还原酶作为制备治疗皮肤创伤药物的应用

说明书

本发明公开人吡咯林‑5‑羧酸还原酶作为制备治疗皮肤创伤药物的应用，本发明通过建立大鼠皮肤创伤模型，采用人吡咯林‑5‑羧酸还原酶(P5CR)进行治疗证实，P5CR治疗组大鼠愈合率加快，创缘组织炎症浸润程度较轻，转化生长因子‑β1(transforming growth factor‑β1，TGF‑β1)表达高峰较早出现，说明P5CR在大鼠皮肤组织创伤愈合及修复过程中发生作用，因此人吡咯林‑5‑羧酸还原酶可作为制备治疗皮肤创伤的药物。

技术领域

本发明涉及一种药物的应用，具体涉及人吡咯林-5-羧酸还原酶作为制备治疗皮肤创伤药物的应用。

背景技术

创伤愈合是物种之间的一种保守进化的过程，包含空间和时间的交错，由三个互相重叠的阶段组成：炎症期、增殖期和重塑期[SeifertAW,2012；7(4):e32875，RichardsonR,2013Jun；133(6):1655-65]。炎症期以血小板聚集、凝血和白细胞迁移为特征；增殖期的特征是再上皮化、血管生成、纤维增生和伤口收缩；最后，重塑期发生在损伤后一个月的时间内，在此期间伴随胶原和基质蛋白的产生，真皮对损伤作出反应，然后恢复到其损伤前表型[KirsnerRS,1993Oct；11(4):629-40]。

吡咯啉-5-羧酸还原酶(P5CR)是普遍存在于原核和真核生物中的一种重要看家蛋白，是脯氨酸代谢途径的关键酶，可以将脯氨酸、鸟氨酸、精氨酸和谷氨酸的中间代谢产物5-吡咯啉羧酸(P5C)还原成为脯氨酸(Proline)，从而参与了脯氨酸生物合成的最后一步反应[MengZ,LouZ,2006Sep；49(1):83-7]。P5CR不仅参与脯氨酸的合成，近年来研究表明其还可以诱导胶原的合成。脯氨酸是胶原蛋白的主要成分之一，胶原蛋白构成胶原纤维，而胶原纤维在皮肤中的分布最为广泛。因此P5CR可以通过调节脯氨酸和胶原的合成而在皮肤代谢中起到重要作用。目前研究已经证实P5CR的缺陷可以导致一种罕见的皮肤病，称为皮肤松弛症，致病的患者有早产儿特征[Reversade B,2009Sep；41(9):1016-21]。目前，尚未有将P5CR直接用于皮肤创伤愈合中的相关研究的报道。如果将P5CR用于皮肤创伤愈合的治疗，将具有广阔的应用前景。

研究发现P5CR是谷氨酸转化为脯氨酸过程中的重要辅酶，而转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)可以上调脯氨酸从头合成途径中所有酶的表达[Hamanaka RB,2019Nov；61(5):597-606]。这表明TGF-β可以通过调节P5CR的表达而影响脯氨酸的合成，进而在胶原蛋白的合成中发挥重要作用。转化生长因子-β1(TGF-β1)是TGF-β超家族成员之一，研究表明TGFβ1可以促进伤口愈合。TGFβ1不但可以刺激细胞外基质(ECM)的产生，而且还可以促进成纤维细胞中纤连蛋白和胶原的合成，从而促进损伤的修复[Roberts AB,1993；8(1):1-9]。另外，TGFβ1还可以抑制新合成胶原的降解[McAnultyRJ,1991Jan31；1091(2):231-5]。

发明内容

本发明的目的是提供了人吡咯林-5-羧酸还原酶作为制备治疗皮肤创伤药物的应用，具体为P5CR在创伤愈合的早期阶段可以促进的TGFβ1表达。

具体采用了以下设计结构及设计方案：

人吡咯林-5-羧酸还原酶作为制备治疗皮肤创伤药物的应用，本发明中所述的P5CR的制备方法如下：

(5)将P5CR置冰上20分钟，常温下放置1小时，30摄氏度温箱30分钟。

(6)缓冲液(20mMCAPS,0.5Msodium chloride,PH9.4)：常温下放置3-4小时，30摄氏度温箱30分钟。

(7)用缓冲液将P5CR稀释至终浓度0.0125mg/ml，配好后置于4摄氏度冰箱保存。