[发明专利]羟氯喹治疗玫瑰痤疮的模型构建方法

说明书

本发明公开了动物和细胞模型构建领域的羟氯喹(Hydroxychloroquine，HCQ)治疗玫瑰痤疮的模型构建方法，以实现通过动物和细胞模型的构建来阐述HCQ对玫瑰痤疮治疗效果的潜在分子机制。为了实现上述目的，本技术方案的实验方法如下，选用7周大小的BALB/C小鼠，然后用640μm浓度的LL37皮内注射可以诱导玫瑰痤疮样皮损并观测羟氯喹对玫瑰痤疮样皮损的改善程度；在体外实验中，构建玫瑰痤疮相关肥大细胞模型，检测羟氯喹对肥大细胞激活的影响。相对于其他实验方式的技术，本技术方案中利用对比实验对同种类小鼠进行诱变和治疗实验，降低了变量条件，提高了实验的准确性。

技术领域

本发明属于动物和细胞模型构建领域，具体是羟氯喹治疗玫瑰痤疮的模型构建方法。

背景技术

玫瑰痤疮是一种常见的慢性面部炎症性疾病，通常分为4种主要亚型：红斑血管扩张性玫瑰痤疮(ETR)，丘疹脓疱性玫瑰痤疮(PPR)，玫瑰痤疮(PHR)和眼部(OR)玫瑰痤疮。玫瑰痤疮的临床特征包括面部红斑，丘疹，脓疱，毛细血管扩张和反复潮红，尽管它不是一种致命的疾病，但对玫瑰痤疮患者的生活质量有不利影响。此外，最近的研究表明，玫瑰痤疮与痴呆和癌症发病风险的增加有关。这些发现表明玫瑰痤疮可能是全身性疾病的反应，值得关注。

美国国家玫瑰痤疮协会的诊疗指南认为，玫瑰痤疮应按照不同亚型给予相应的治疗。本技术主要针对红斑毛细血管扩张型。目前针对红斑毛细血管扩张型的药物包括局部治疗、系统治疗、以及激光治疗。目前中外各国治疗指南中出现的外用药物包括肾上腺素受体激动剂、壬二酸等。α肾上腺素受体激动剂，可以通过促进血管平滑肌收缩，从而收缩血管，因此仅对有平滑肌层的血管有作用，而对于缺乏平滑肌层的细小血管及毛细血管无收缩作用。

大多数其他口服方案的研究已经表明，口服四环素或米诺环素具有高或不明确的偏倚风险。因此，需要新的、有效的、良好的耐受性和方便的口服药来减轻玫瑰痤疮的症状和体征，并为玫瑰痤疮患者提供更广泛的治疗，特别是对那些有多西环素耐受不良的患者。羟氯喹(HCQ)于1955年被FDA批准用于狼疮治疗，目前常用于治疗系统性自身免疫性疾病患者，并被认为在妊娠期间是安全的。

LL37(LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTE)是人抗菌肽CAMP的水解产物，在基础研究中可以作为玫瑰痤疮样模型的建立。

近年来，虽然HCQ在中国成功应用于玫瑰痤疮的治疗，但玫瑰痤疮的治疗缺乏高质量的数据。综上所述，现有技术存在的问题是：HCQ被用作玫瑰痤疮的治疗选择，但其治疗效果的潜在分子机制尚不清楚。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是通过动物和细胞模型的构建以阐述HCQ对玫瑰痤疮治疗效果的潜在分子机制，为玫瑰痤疮提供一种新的治疗方案。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：羟氯喹治疗玫瑰痤疮的模型构建方法，包括以下步骤，

S1、选用7周大小的BALB/C实验鼠；

S2、随后将小鼠分为四组，分别为A组阴性对照组、B组羟氯喹处理组、C组玫瑰痤疮模型组和D组LL37加羟氯喹治疗组；

S3、对每组的造模时间均为一周，其中A组给予100μlPBS灌胃7天，B组给予100μlHCQ溶液灌胃连续7天，最后两天A、B组同时进行PBS皮内注射；C组给予100μlPBS灌胃7天,D组给予100μlHCQ溶液灌胃7天，最后两天C、D组同时予以LL37皮内注射；

S4、造模完成24小时之后，收取小鼠背部皮肤，将剪下的背部皮肤分别进行-80℃、液氮冷冻处理以及组织固定液中保存；

S5、对冷冻处理完成后的组织进行样本化处理，其中-80℃冷冻的组织进行免疫荧光和免疫组化检测，液氮冷冻的组织用来提取RNA，组织固定液中的用以HE或甲苯胺蓝染色；