[发明专利]一种等位特异性位点编辑方法

权利要求书

1.一种等位特异性位点编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取MII期的小鼠卵母细胞分为两组，第一组对其进行Cas9 mRNA和靶向目的基因的sgRNA的显微注射，第二组不做任何处理；

2）操作后的卵母细胞进行短暂恢复后对两组MII卵母细胞同时进行体外受精；

3）等待胚胎发育到受精卵PN3-4时期，利用原核互换的显微操作方法，将注射组受精卵的雌雄原核分别取出，然后将未处理组受精卵分为两组，一组去掉雌原核，一组去掉雄原核；再将注射组分别取出的雌雄原核各自融合到已经弃掉单原核的未处理组受精卵中；

4）将操作后受精卵放入培养箱中等待其充分恢复从而组成一个新的重构胚胎；

所述短暂恢复是在培养箱中恢复15-30分钟；

所述编辑方法是非疾病诊断和治疗目的。

2.根据权利要求1所述的等位特异性位点编辑方法，其特征在于，步骤4）之后还包括步骤5）：将重构胚胎进行体外培养到囊胚。

3.根据权利要求1所述的等位特异性位点编辑方法，其特征在于，步骤4）之后还包括步骤5）：将重构胚胎进行胚胎移植入假孕受体产生胎儿。

4.根据权利要求2或3所述的等位特异性位点编辑方法，其特征在于，步骤5）之后还包括步骤6）：重构胚胎或胎儿利用Sanger测序进行基因型鉴定。

5.根据权利要求1所述的等位特异性位点编辑方法，其特征在于，步骤3）中将注射组分别取出的雌雄原核各自融合到已经弃掉单原核的未处理组受精卵中所采用的方法是基于仙台病毒蛋白的胞膜融合方法。

6.一种构建携带有胚胎致死性基因突变动物模型的方法，其特征在于，包含权利要求1-5任一所述等位特异性位点编辑方法的步骤。