[发明专利]一种多肽疫苗、制备方法及应用

说明书

本发明属于疫苗技术领域，公开了一种多肽疫苗的制备方法及应用，对包材西林瓶瓶身、瓶盖、瓶塞分别进行清洗，然后进行灭菌；配制含0.5％DMSO的生理盐水和DMSO混合液作为溶剂，溶剂震荡混匀待用；将溶剂添加到多肽冻干粉中，吹打10次混匀；将含有多肽的溶液进行除菌过滤，将过滤后溶液分装至西林瓶中。本发明利用干热灭菌，去除西林瓶中微生物以及残留内毒素，使用高温高压湿热灭菌，对瓶盖、瓶塞进行除菌。本发明使用对多肽破坏性较小，防止侧链氧化，又能溶解多肽的溶剂。本发明配制的浓度的多肽存放于‑80℃，性质稳定，可长期存放。本发明的工艺适合制备个性化定制的疫苗并且符合药典规定的无菌和安全性要求。

技术领域

本发明属于疫苗技术领域，尤其涉及一种多肽疫苗、制备方法及应用。

背景技术

我国是肝癌大国随着肿瘤免疫学和临床免疫治疗应用的深入，肿瘤免疫治疗正成为继手术、放化疗、靶向治疗之后的一种常规治疗手段。肿瘤免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域的研究热点。2013年，肿瘤的免疫治疗被《Science》杂志评为年度十大科学突破之首。2016年，美国临床肿瘤学会(ASCO)宣布免疫治疗为年度肿瘤研究的首要进展。肿瘤新生抗原(neoantigens)是肿瘤细胞由于基因变异而产生的特异存在于肿瘤细胞中的多肽或者蛋白，其上面载有的一些新生抗原表位能被免疫系统识别，从而精准地攻击肿瘤细胞。以肿瘤新生抗原为靶点的治疗，相较于传统的肿瘤相关抗原治疗具有特异性强、对正常组织伤害小、自身免疫概率低、可多靶点同时进行治疗等优点，能够特异性激活细胞毒性T细胞，实现对肿瘤细胞的杀伤。

研究表明，基于肿瘤新生抗原的治疗通过激活和提高患者体内新生抗原特异性T细胞的比例及活性，靶向杀伤患者的肿瘤组织。2017年7月，《nature》上同日刊登两篇以新生抗原为靶点成功治疗晚期黑色素瘤的临床研究，力挺基于新生抗原的个体化肿瘤治疗模式。其中，Ugur Sahin的研究团队纳入13例晚期黑色素瘤患者，经治疗后8人肿瘤完全消失；Patrick的研究团队纳入6名患者，经治疗后4人肿瘤完全消失，在32个月内没有复发，另外两人在接受PD-1辅助治疗后肿瘤也完全消失。与此同时，基于新生抗原的精准免疫治疗在一些实体瘤如胆管癌和结直肠癌中也展现出惊人的疗效。被誉为过继性T细胞治疗之父的Steve Rosenberg教授及其研究团队，对一位肺、肝等多处癌转移且放化疗均告失败的晚期胆管癌患者的肿瘤组织进行测序并鉴定出新生抗原，随后分离出新生抗原特异性T淋巴细胞回输入患者体内，发现患者在治疗的两年期间(截止到他们文章发表)，肿瘤明显缩小，病情稳定(一般晚期胆管癌的平均生存期不超过10个月)。随后，《NEJM》又报道该研究团队利用同样的过继性T细胞疗法成功治疗了一位晚期转移性结直肠癌的患者。综上所述，利用患者个体化的肿瘤新生抗原，制备靶向新生抗原的多肽疫苗治疗恶性肿瘤，是目前国际上最先进的精准靶向治疗恶性肿瘤的方案之一。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)寻找一种可以溶解多数制备多肽疫苗所需原料多肽的溶剂。

(2)寻找一种对包材进行彻底灭菌，获得微生物含量，内毒素，真菌葡聚糖符合药典规定的包材。

(3)寻找一种去除疫苗中微生物，获得符合药典规定的疫苗的方法。

解决上述技术问题的难度：

(1)制备多肽疫苗的原料多肽在药典许可的溶剂中溶解度不同，难以使用单一溶剂溶解所有多肽。

(2)包材材质不同，西林瓶瓶身材质是中硼硅，塞子是丁基橡胶，达到无菌，不含内毒素的要求的灭菌方式要求不同。

(3)疫苗制备原料之一是多肽，使用溶剂溶解后，需要使用不破坏多肽结构和活性，损耗性低的除菌方式。

解决上述技术问题的意义：

(1)使用5％DMSO和生理盐水混合液作为溶解，可以溶解多肽，多肽的充分溶解可以减少多肽的损耗，提高用药效果。