[发明专利]一种血样中五种抗肿瘤药物的富集检测方法及应用

权利要求书

1.一种血样中五种抗肿瘤药物的富集检测方法，所述方法采用固相萃取技术富集，联合高效液相色谱串联质谱进行检测，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）五种药物的富集：

取待测血样，首先加入碱溶液将pH值调整至9~12，然后加入内标溶液，混匀放置15分钟后，过固相萃取装置，分别加入水和混合液进行淋洗，最后用含甲酸有机试剂进行洗脱，得洗脱液；

（2）五种药物的检测：

将步骤（1）中得到的洗脱液采用高效液相色谱串联质谱进行分析，计算药物和内标峰面积比值，通过内标法建立标准曲线计算血样中药物浓度；

所述五种抗肿瘤药物为甲氨蝶呤、紫杉醇、多西他赛、伊马替尼、吉非替尼；

步骤（1）中，所述血样为血清、血浆或全血，体积为50~200μL；所述碱溶液选自KOH溶液或NaOH溶液，质量分数为1%~10%；所述固相萃取装置的填料为C18SAX；固相萃取方式选自固相萃取柱或固相萃取96孔样品板；选用固相萃取规格为50~200mg/mL，其中mg为填料重量，mL为萃取柱体积或96孔样品板的单孔体积；所述混合液为40%~60%有机试剂水溶液；所述有机试剂选自甲醇、乙醇或乙腈，所述甲酸的体积分数为0.5%~2%；

步骤（2）中，其中高效液相色谱条件：

色谱柱：Phenomenex Kinetex C18 2.6μm，5*50mm；柱温40℃；进样器温度10℃；流动相A为含0.1%甲酸的水，B为甲醇，梯度洗脱为：0-0.2min，流动相B为22%；0.2-1.2min，流动相B由22%升高到95%；1.2-2.5min，流动相B为 95%；2.6-3.5min，流动相B为 22%；流速为0.4mL/min，进样量1μL；

其中质谱参数为：

离子化模式：ESI+；喷雾电压：4500V；温度：450℃；雾化器GS1：40psi；辅助雾化气GS2：40psi；气帘气：30psi；扫描方式：多反应检测MRM；

。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述标准曲线的各个药物浓度范围为：紫杉醇5-1000ng/mL，多西他赛5-1000ng/mL，伊马替尼50-10000ng/mL，吉非替尼20-4000ng/mL，甲氨蝶呤0.1-20μmol/L。