[发明专利]一种应用于污染物质和实际水样检测的生物急性毒性检测方法

说明书

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及一种应用于污染物质和实际水样检测的生物急性毒性检测方法，包括以下步骤：(1)制备实验样品和阴性对照样品；(2)取得过滤后的水体样品；(3)在无菌条件下制备发光细菌菌液；(4)生物毒性测试：得到Isubgt;0/subgt;和Isubgt;15/subgt;；(5)生物毒性计算：根据发光强度计算发光抑制率，选择适当的函数模型，计算单一的污染物质对发光细菌急性毒性的ECsubgt;50/subgt;值；对比阴性对照和实际水样的发光抑制率，测得实际水体的生物毒性。发光细菌生物毒性试验相对于水蚤生物毒性试验、藻类毒性试验和鱼类毒性试验，具有周期短、准确度好、检测范围宽、检测场所任意(现场、实验室)的优点，能够快速的完成对实际水体进行测定。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及一种应用于污染物质和实际水样检测的生物急性毒性检测方法。

背景技术

随着工业的发展，进入环境中的毒性污染物呈现种类多样、数量频发的趋势，对环境的危害趋于复杂化和综合化。重污染产业飞速发展，工业废水大量排入城市污水处理厂，废水中有毒物质种类也随之增多，传统的水质检测手段已经无法快速、有效地应对各种复杂的污染状况，需要一种快速、灵敏、低成本检测环境毒性的生物检测方法。

生物毒性检测所采用的方法主要是生物毒性试验，如鱼类急、慢性毒性试验、溞类毒性试验、藻类毒性试验、微生物毒性试验及斑马鱼胚胎发育技术毒性检测方法等。

随着微生物以及发光细菌的深入研究和现代光学检测技术的突破，基于发光细菌法的水质急性毒性检测法成为一种新型的检测手段，并逐步应用于环境毒性检测的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种应用于污染物质和实际水样检测的生物急性毒性检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明实现目的所采用的方案是：一种应用于污染物质和实际水样检测的生物急性毒性检测方法，包括以下步骤：

(1)制备若干不同浓度、不同种类的实验样品和阴性对照样品；

(2)按照标准取样方法对实际水体进行取样，并对实际水体样品进行过滤除杂，取得过滤后的水体样品；

(3)在无菌条件下制备发光细菌菌液：取冻干菌，加入复苏液，摇匀后放到4℃下平衡复苏，然后采用2％NaCl溶液稀释至一定发光强度；

(4)生物毒性测试：取稀释后的菌液100μL置于96孔板上，该菌液用微孔板发光检测仪测发光强度，记为I₀，然后加入等体积样品，轻轻震荡，混合均匀，用微孔板发光检测仪测定加入样品15min时发光细菌的发光强度，记为I₁₅；

(5)生物毒性计算：根据发光强度计算发光抑制率，选择适当的函数模型对各实验样品的单一污染物质的“剂量-效应”数据进行拟合，得到污染物质对发光细菌的“剂量-效应”曲线、拟合函数及拟合参数，计算单一的污染物质对发光细菌急性毒性的EC₅₀值；对比阴性对照和实际水样的发光抑制率，测得实际水体的生物毒性。

所述步骤(1)中，采用0.20μm的聚四氟乙烯滤膜对实际水体样品进行过滤，取得过滤后的水体样品。

优选地，所述步骤(1)中，阴性对照样品为2％NaCl溶液。

优选地，所述步骤(1)中，实验样品种类包括重金属离子和有机溶剂，向其中加入氯化钠，配成一定浓度的溶液，使污染物质NaCl质量浓度为2％，有机溶剂先加入质量浓度为1％的甲醇。