[发明专利]一种含未成熟树突状细胞外泌体的缓释微球及其制备方法

说明书

本发明公开了一种含未成熟树突状细胞外泌体的缓释微球及其制备方法，该缓释微球为含未成熟树突状细胞外泌体的海藻酸钙微球。本发明利用温和的制备条件，将在体内不易保存的未成熟树突状细胞的外泌体负载到微球中；且本发明采用的海藻酸钙有良好的生物相容性，使外泌体随着微球在体内的逐渐降解，发挥更持久的免疫抑制的效果，有利于维持免疫耐受的状态。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种含未成熟树突状细胞外泌体的缓释微球及其制备方法。

背景技术

器官移植作为解决肢体毁损和大面积组织缺损常用方案，其面临的免疫排斥问题严重阻碍其临床应用，如何彻底解决免疫排斥问题依旧是器官移植研究的重点。

树突状细胞(dendritic cells，DCs)是体内最强大的专职抗原呈递细胞，参与免疫应答的各个环节，在自身免疫疾病炎性损伤过程中扮演着重要作用。DCs具有不成熟和成熟两种不同的状态，为其发育的不同阶段，正常情况下，体内绝大多数处于非成熟状态。未成熟树突状细胞(immature dendritic cells，imDCs)因其表面低水平表达MHC II类分子和共刺激分子(CD40、CD80、CD86)，能诱导抗原特异性T细胞无能或凋亡，从而诱导了对该抗原的耐受，在器官移植的生物治疗中扮演重要角色。

imDCs来源的外泌体(imDCs-derived exosome，imDCex)是由imDCs分泌的直径为30～150nm的小囊泡，内含来源于细胞相关的蛋白质与核苷酸等生物分子，具有与imDCs相似的功能。作为载体传递信息，imDCs来源的外泌体具有显著的优越性：①与单纯本细胞应用相比，具有性质稳定、易于保存、没有免疫原性、获取容易且方便改造等诸多优势，为多种疾病的治疗提供了新的手段；②外泌体代表了一种新的远距离作用模式，并不局限于细胞间的直接接触，具有快速传递信号及信号放大的能力。

但外泌体为细胞分泌物，在体内易于降解，无法长期稳定存在。因此借助缓释载体，使其在体内缓慢释放，可以起到维持疗效的作用。将imDCs来源的外泌体负载在具有良好生物相容性的微球材料中，目前尚未见报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种含未成熟树突状细胞外泌体的缓释微球及其制备方法，该微球采用具有良好生物相容性的海藻酸钙，可在体内逐渐降解，实现长期免疫耐受的作用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种含未成熟树突状细胞外泌体的缓释微球，上述缓释微球为含未成熟树突状细胞外泌体的海藻酸钙微球。

进一步地，上述缓释微球为规则球形结构。

本发明的第二方面是提供该含未成熟树突状细胞外泌体的缓释微球的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，未成熟树突状细胞外泌体的制备：

S1获取骨髓树突状细胞，在含有粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素4的培养液中培养；

S2培养完成后，收集细胞培养液，然后对其进行差速超速离心；

S3离心完成后，倒掉上清，用PBS重悬沉淀，然后再次离心，倒掉上清，用PBS重悬沉淀，便获得未成熟树突状细胞外泌体溶液；

步骤二，缓释微球的制备：

S1按照体积份数量取未成熟树突状细胞外泌体溶液和海藻酸钠溶液，充分搅拌均匀得到外泌体海藻酸钠悬液；

S2称取氯化钙配制为浓度为1mol/l的固化液；

S3将外泌体海藻酸钠悬液装入静电喷雾机中，设置该静电喷雾机的运行参数并启动，喷口出喷洒出喷雾微滴分散于上述固化液，便得到该缓释微球。