[发明专利]一种高产量水痘病毒培养方法在审
申请号: | 202010373378.1 | 申请日: | 2020-05-06 |
公开(公告)号: | CN111484985A | 公开(公告)日: | 2020-08-04 |
发明(设计)人: | 杨骏宇;余军;李凡;唐阳;望朔;杨文彬;赵永强;朱实惠 | 申请(专利权)人: | 江苏金迪克生物技术股份有限公司 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00;C12R1/93 |
代理公司: | 北京中政联科专利代理事务所(普通合伙) 11489 | 代理人: | 何浩 |
地址: | 225300*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 产量 水痘 病毒 培养 方法 | ||
1.一种高产量水痘病毒培养方法,其特征在于:具体包括以下步骤:
S1、细胞复苏:将来源于ATCC的工作细胞库MRC-5细胞复苏传代,细胞生长液为含10~20%新生牛血清的M199-801培养液,37℃,5%CO2培养,经过3~4天后,细胞长满单层,准备传下一代;
S2、细胞传代:0.01mol/L PBS液洗涤细胞表面两次,加入适量预温EDTA-Trypsin消化液,待细胞面肉眼观察出现间隙时,弃尽消化液,加入少量细胞培养液,吹打使细胞分散均匀,按1:4~1:8比例进行传代,将细胞最终传代至Corning HYPERStack培养室中,补加入至0.2~0.3ml/cm2的5~10%新生牛血清M199-801培养液,置37℃、5%CO2培养;
S3、病毒接种:当细胞单层融合度为80~90%时,取水痘工作种子批进行感染,感染复数(MOI)为0.001~0.01;
S4、病毒培养:将S3中的细胞加入维持液为2~5%的新生牛血清pH7.2~7.4M199-801培养液,维持液量为0.2~0.3ml/cm2,置35℃、5%CO2培养条件下培养;
S5、收获:当CPE达到50%以上时收获细胞,0.01mol/L PBS液洗涤细胞表面两次,然后按0.1ml/cm2加入0.05%EDTA消化液,待细胞面肉眼观察出现间隙时,用吸管吸取细胞液至离心瓶中,放入离心机,0.01ml/cm2培养面积加入冻干保护剂,用吸管轻轻吹打混匀后放入冷冻瓶中。
2.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养方法,其特征在于:所述S1中,CO2的体积分数为5%,且环境温度为37℃。
3.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养方法,其特征在于:所述S2中,细胞按1:4~1:8比例进行传代,将细胞最终传代至Corning HYPERStack培养室中。
4.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养方法,其特征在于:所述S4中,维持液持液为2~5%的新生牛血清pH7.2~7.4M199-801培养液,维持液量为0.2~0.3ml/cm2,置35℃、5%CO2培养条件。
5.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养方法,其特征在于:所述S5中,通过离心机进行离心时的转速为1000rpm,且离心5分钟。
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