[发明专利]一种低蛋白含量的无血清无饲养层胚胎与多能干细胞培养基

权利要求书

1.一种无血清培养基，其特征在于，由NaHCO₃、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、L-抗坏血酸、硫酸锌、重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人转化生长因子β、小分子抑制剂SB-216763、小分子抑制剂5-AzaC、叶酸和基础培养基组成；

各组分用量如下：

NaHCO₃ 400 mg/L

亚硒酸钠 30μg/L

乙二胺四乙酸铁 300μM

L-抗坏血酸 55mg/L

硫酸锌 30μg/L

重组人碱性成纤维细胞生长因子 50μg/L

重组人转化生长因子β 10μg/L

小分子抑制剂SB-216763 10μM

小分子抑制剂5-AzaC 10μM

叶酸 45 mg/L

基础培养基 补足。

2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。

3.如权利要求1至2中任一项无血清培养基的制备方法，其特征在于，包括：将NaHCO₃、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、L-抗坏血酸、硫酸锌、重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人转化生长因子β、小分子抑制剂SB-216763、小分子抑制剂5-AzaC、叶酸溶解于基础培养基，过滤除菌。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述过滤除菌所用滤膜的孔径为0.2~0.3μm。

5.一种非诊断治疗目的的胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，采用权利要求1至2中任一项无血清培养基培养胚胎干细胞。

6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述胚胎干细胞为第7~9代胚胎干细胞，所述培养的密度为（1~10）×10⁴cell/cm²。