[发明专利]一种cAMP荧光探针G-Flamp1的应用

说明书

本发明公开了一种cAMP荧光探针G‑Flamp1的应用，一种cAMP荧光探针G‑Flamp1在激发波长为430‑470nm的单光子或激发波长为880‑920nm的双光子成像中的应用，所述G‑Flamp1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。相较于目前已有荧光探针的动态范围，本发明在37℃生理温度培养细胞中，采用430‑470nm单光子或880‑920nm双光子激发G‑Flamp1探针，获得了目前最大动态范围ΔF/Fsubgt;0/subgt;～10‑15，在检测灵敏度方面有了很大提高；在活体脑片神经元中，在60μM Forskolin刺激下，ΔF/Fsubgt;0/subgt;平均值也达到了7，可以在神经元中很好的表达和响应；实际使用时，将G‑Flamp1表达在离体培养的哺乳动物细胞或活体细胞中，利用荧光显微镜或者双光子显微镜，检测细胞受特定刺激后cAMP浓度是否发生改变。

技术领域

本发明属于生物医学光学与分子影像学技术领域，具体涉及一种cAMP荧光探针G-Flamp1的应用。

背景技术

环磷酸腺苷(cAMP)是目前最大药物靶标G蛋白偶联受体(GPCR)家族的下游信使分子，cAMP荧光探针及其活细胞和活动物体显微成像是GPCR信号通路的基础研究和药物开发的重要方向。活细胞中cAMP荧光成像是指将cAMP荧光探针表达在细胞中，然后利用荧光显微镜检测探针荧光信号(如强度)变化。荧光探针是cAMP荧光成像分析的关键。cAMP荧光探针主要分为基于荧光蛋白的荧光共振能量转移探针及基于单个荧光蛋白的探针，后者动态范围较前者大且使用简单。目前基于单个荧光蛋白的cAMP探针分为绿色和红色2小类，前者主要有Flamindo2、cADDis及cAMPr，后者主要有Pink Flamindo、Red cADDis及R-FlincA。在37℃生理温度培养细胞中，上述探针动态范围均较小，如下表所示。实际应用中，动态范围(荧光亮度变化幅度,ΔF/F₀)是很重要的参数，与检测灵敏度直接相关。因此提高探针在实际应用中的动态范围，对于提高探测灵敏度具有重要意义。

参考文献：

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