[发明专利]一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒，其特征在于：包括用于检测TYMS基因表达水平的引物组和探针、用于检测内参基因β-actin表达水平的引物组和探针：

TYMS-F上游引物：TGACTTTATACACACTTTGGGAGA，

TYMS-R下游引物：CCTTCAATCTGAAAGTCTTCA，

TYMS-P探针：FAM-CTTCGAAAAGTTGAGAAAATTGATG-TRAMA；

β-actin-F上游引物：ACCATGTACCCGGGCATT，

β-actin-R下游引物：TCTGCTGGAAGGTGGACAGTG，

β-actin-P探针：VIC-CATCGCACCCCCAGAGCGCAAGT–TRAMA。

2.如权利要求1所述一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒，其特征在于：还包括标准对照品和阴性对照品。

3.如权利要求2所述一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒，其特征在于：所述阴性对照品为DEPC处理的去离子水。

4.如权利要求1所述一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒，其特征在于：所述探针5’端荧光基团为适用于荧光定量PCR分析的常规使用的荧光报告基团，所述荧光报告基团为FAM、VIC、HEX、cy5或者ROX；3’端的淬灭基团为适用于荧光定量PCR的常规使用的荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团为TAMRA、BHQ1、BHQ2、MGB或者Dabcy1。

5.如权利要求4所述一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒，其特征在于：用于检测TYMS基因表达水平的探针5’端荧光报告基团选用FAM，3’端的荧光淬灭基团选用TAMRA；用于检测内参基因β-actin表达水平的探针5’端荧光报告基团选用VIC，3’端的荧光淬灭基团选用TAMRA。

6.一种基于权利要求1-5中任一项所述人类TYMS基因表达水平检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

1)收集待检患者的外周血，提取总RNA，将所得的总RNA逆转录为cDNA备用；

2)以所述cDNA、标准对照品和阴性对照品为模板分别配置PCR反应体系，混匀后进行荧光定量PCR，同时收集FAM和VIC信号，执行实时PCR；

3)记录所述PCR反应体系中FAM和VIC通道的Ct值，并对结果进行基因分型判读。

7.如权利要求6所述一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒的使用方法，其特征在于：所述荧光定量PCR的条件为：

第一阶段：95℃2分钟，1个循环；

第二阶段：95℃30秒，60℃30秒，72℃30秒，5个循环；

第三阶段：95℃30秒，60℃30秒，72℃30秒，40个循环；

信号收集：第三阶段60℃时收集FAM和VIC信号，执行实时PCR。

8.如权利要求6所述一种人类TYMS基因表达水平检测试剂盒的使用方法，其特征在于：所述PCR反应体系包括5×colorless Goq Flexi Buffer、Mgcl₂溶液、PCR核糖核酸(PCRnuclextide)、热启动聚合酶(Hot start polymerase)、TYMS基因上游引物、TYMS基因下游引物、TYMS基因探针、β-actin基因上游引物、β-actin基因下游引物、β-actin基因探针、模板(Template)、DDH₂O。