[发明专利]一种快速检测百菌清及其氧化还原产物的方法

权利要求书

1.一种快速检测百菌清及其氧化还原产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备百菌清分子印迹聚合物，制备方法如下：

以母体百菌清为模板分子，以乙腈为致孔剂，以丙烯酰胺为功能单体，以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以偶氮二异丁腈分别为引发剂，并按照如下方法制备：

(1)称取百菌清，并溶解于乙腈中，然后加入丙烯酰胺，于室温下超声振荡30min，使百菌清与丙烯酰胺完全结合；接着，加入乙二醇二甲基丙烯酸酯以及偶氮二异丁腈，继续超声振荡15min，使其充分混合均匀；充氮气排氧后密封，于60℃水浴锅中加热16h，得到白色固体聚合物；其中，百菌清：丙烯酰胺：乙二醇二甲基丙烯酸酯：偶氮二异丁腈的摩尔比为1：7：40：0.6；

(2)将步骤(1)得到的白色固体聚合物进行粉碎研磨，并过200目筛；

(3)用有机溶剂索氏提取以洗脱聚合物中的百菌清，洗脱时间为30h，接着再用超纯水洗脱至中性，最后将产物放于60℃烘箱中干燥24h，即得目标所需的以百菌清为虚拟模板的百菌清分子印迹聚合物MIPs；

S2、将所述百菌清分子印迹聚合物与硅藻土混合装柱制得百菌清分子印迹固相萃取柱；所述百菌清分子印迹固相萃取柱中，硅藻土：百菌清分子印迹聚合物的质量比为1：1-1：2；

S3、将制得的百菌清分子印迹固相萃取柱用于待测样品处理，得洗脱液；

其中，所述待测样品包括水体、蔬菜、水果、粮食；当所述待测样品为蔬菜、水果或粮食时，先将蔬菜、水果或粮食匀浆处理，然后加入0.5％HCl乙腈溶液作为提取剂来提取，接着旋涡振荡2min，超声波提取30min，10000r/min离心10min，取上清液；最后用氮吹仪吹干，再用乙腈溶解，纯水稀释后得待测样品溶液；

所述用于待测样品处理的百菌清分子印迹固相萃取柱为利用甲醇溶液与水溶液活化处理后的百菌清分子印迹固相萃取柱；

待所述待测样品溶液与活化处理后的百菌清分子印迹固相萃取柱均准备到位，将所述待测样品溶液以1mL/min的流速过百菌清分子印迹固相萃取柱上样，并采用5％甲醇-水淋洗除杂，然后用6.0mL丙酮洗脱，得洗脱液；

S4、对步骤S3处理所得洗脱液，用色谱法检测洗脱液中的百菌清及其氧化还原产物含量；其中，所述百菌清及其氧化还原产物包括4-羟基百菌清、5-氯1，3-间苯二腈、2，5-二氯-1，3-间苯二腈、2，4，5-三氯-1，3-间苯二腈；采用的色谱法色谱条件为：色谱柱：ZORBAX SB-C18，规格4.6mm×250mm，5μm；可变波长紫外检测器，检测波长为220nm、236nm；流动相B是乙腈，流动相C是水，进样量：20μL；柱温：25℃；流速：1mL/min；流动相梯度洗脱程序如下：

步骤	时间min	流动相B％	流动相C％
1	0	25	75
2	20	60	40
3	25	52	48
4	26	10	90
5	30	10	90
6	35	25	75

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